中枢神経原発悪性リンパ腫の発症を支持する脳内免疫環境細胞の同定

2021 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 19K17820
• 研究機関: 筑波大学
• 研究代表者: 服部 圭一朗 筑波大学, 附属病院, 講師 (10832024)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2023-03-31
• キーワード: 中枢神経原発悪性リンパ腫

研究実績の概要

中枢神経系原発悪性リンパ腫（Primary central nervous system lymphoma: PCNSL）は脳内に原発する悪性リンパ腫で、殆どの症例はびまん性大細胞性B細胞リンパ腫 (Diffuse large B cell lymphoma; DLBCL)の病理形態を示す。
ゲノム解析を通じて、約70％の患者において腫瘍からL265P MYD88変異が認められることを確認した（British Journal of Haematology 2016）。全身性DLBCLにおいても同様の遺伝子変異は報告されているものの、それらと比較するとPCNSLにおける変異頻度のほうが各段に高いことが示された。特に免疫異常に関係する遺伝子の変異（B2M、CD58、HLA-A/-B）や、PDL-1/PDL-2の発現上昇やゲノム増幅をPCNSLにおいて高頻度に認めたことから、全身性DLBCLとの遺伝子型と表現型の違いの原因として、脳内の特殊な免疫環境が影響しているという仮説を立てた。
その検証のために、新規核酸定量システムnCounterを使用して40症例のサンプルに対してRNA定量解析を行い、腫瘍細胞及び環境因子に関連した遺伝子発現のレベルを確認した。並行して、DLBCLで高頻度に変異が見られる遺伝子をターゲットとして、同一サンプルに対して変異解析を行った。
現在、PCNSLの微小環境の解明のため、遺伝子変異と免疫細胞の分布パターンとの関連について解析中である。解析の際には、Newmanらの開発した、各細胞腫の
構成比を推定する手法であるCIBERSORT や、東大医科研のスーパーコンピューターSHIROKANEを用いて小川、宮野らが開発したパイプラインであるGENOMON を用いて解析を行った。いずれの解析技術も申請者はすでに確立し、一部のサンプルについてはデータを得ている。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

当院保管の中枢神経原発悪性リンパ腫の保存サンプルからDNA及びRNAを抽出し、それらを利用した解析を行った。すでに保存してあるサンプルのうち、40サンプルに対する解析がほぼ終了しており、現在は各種臨床情報や、過去にそれらのサンプルに対して行った遺伝子変異データなどを集め、DNA＆RNA解析によって得られた遺伝子発現量とデータとの関連を調べている。

今後の研究の推進方策

中枢神経原発悪性リンパ腫の腫瘍細胞と腫瘍以外の細胞をセルソーターによって分離した上で、10XGenomicsを利用したシングルセルRNAシーケンスを行うことで、特定の発現プロファイルをとる微小環境細胞の分布をシングルセルレベルで明らかにする。当院における年間のPCNSLの新規発症症例数が12~15症例程度であるため、これらの新鮮なサンプルを使用したRNAシークエンスは年間で5症例程度を見込んでおり、同時にこれらの細胞分画についてはPCNSLでの高頻度に変異が見られる30遺伝子について変異解析を行い、変異の結果と微小環境細胞の分布を調べる。

研究成果

• [雑誌論文] Monitoring of MYD88 L265P mutation by droplet digital polymerase chain reaction for prediction of early relapse in a patient with Bing-Neel syndrome. (2021)
  • 著者名/発表者名: Shikata H, Kihara H, Kaneko M, Matsukage S, Hattori K.
  • 雑誌名: Int J Hematol 巻: 113 ページ: 586-591
  • DOI: 10.1007/s12185-020-03038-x.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Retrospective analyses of other iatrogenic immunodeficiency-associated lymphoproliferative disorders in patients with rheumatic diseases. (2021)
  • 著者名/発表者名: Kaji D, Kusakabe M, Sakata-Yanagimoto M, Makishima K, Suehara Y, Hattori K, Ota Y, Mitsuki T, Yuasa M, Kageyama K, Taya Y, Nishida A, Ishiwata K, Takagi S, Yamamoto H, Asano-Mori Y, Ubara Y, Izutsu K, Uchida N, Wake A, Taniguchi S, Yamamoto G, Chiba S.
  • 雑誌名: Br J Haematol 巻: 195 ページ: 585-594
  • DOI: 10.1111/bjh.17824.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Tet2-deficency in immune cells exacerbates tumor progression by increasing angiogenesis in a lung cancer model. (2021)
  • 著者名/発表者名: Nguyen YTM, Fujisawa M, Nguyen TB, Suehara Y, Tatsuhiro S, Matsuoka R, Abe Y, Fukumoto K, Hattori K, Noguchi M, Matsubara D, Chiba S, Sakata-Yanagimoto M.
  • 雑誌名: Cancer science 巻: 112 ページ: 4931-4943
  • DOI: 10.1111/cas.15165.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intratumor heterogeneity of lymphoma identified by multiregion sequencing of autopsy samples. (2021)
  • 著者名/発表者名: Makishima K, Suehara Y, Abe Y, Hattori K, Kusakabe M, Matsuoka R, Chiba S, Sakata-Yanagimoto M.
  • 雑誌名: Cancer science 巻: 113 ページ: 362-364
  • DOI: 10.1111/cas.15178.
  • 査読あり
• [雑誌論文] A single-cell atlas of non-haematopoietic cells in human lymph nodes and lymphoma reveals a landscape of stromal remodelling. (2021)
  • 著者名/発表者名: Abe Y, Sakata-Yanagimoto M, Fujisawa M, Miyoshi H, Suehara Y, Hattori K, Kusakabe M, Sakamoto T, Nishikii H, Nguyen TB, Owada Y, Enomoto T, Sawa A, Bando H, Yoshida C, Tabata R, Terao T, Nakayama M, Ohshima K, Usuki K, Oda T, Matsue K, Chiba S
  • 雑誌名: Nature cell biology 巻: 24 ページ: 565-578
  • DOI: 10.1038/s41556-022-00866-3.
  • 査読あり
• [学会発表] A Comprehensive Single-Cell Atlas of Nonhematopoietic Cells in Human Lymph Node and Lymphoma Reveals Landscape of Stromal Remodeling (2021)
  • 著者名/発表者名: 安部佳亮,坂田（柳元）麻実子，藤澤 学，三好寛明，末原泰人，服部圭一朗，日下部学，坂本竜弘，錦井秀和，Nguyen Tran，吉田近思，大和田洋平，榎本剛史，坂東裕子，中山雅博，大島孝一，臼杵憲祐，小田竜也，末永孝生，千葉 滋
  • 学会等名: 第61回日本リンパ網内系学会総会
• [学会発表] 高度な骨髄線維化を認め診断に苦慮したリンパ形質細胞性リンパ腫の１例 (2021)
  • 著者名/発表者名: 宝田亜矢子,百瀬春佳，栗田尚樹，坂本竜弘，加藤貴康，服部圭一朗，末原泰人，横山泰久，錦井秀和，丸山ゆみ子，小原 直，松岡亮太，坂田（柳元）麻実子，千葉 滋
  • 学会等名: 第16回 日本血液学会関東甲信越地方会