2023 年度実施状況報告書

PPARgの新規転写共役因子SFPQ/PSFの脂肪細胞の分化における役割

研究課題

研究課題/領域番号	19K17953
研究機関	群馬大学
研究代表者	土岐明子群馬大学, 大学院保健学研究科, 助教 (30733935)
研究期間 (年度)	2019-04-01 – 2025-03-31
キーワード	脂肪細胞分化 / sfpq
研究実績の概要	これまでに申請者らは3T3-L1前駆脂肪細胞を用いて、splicing factor proline/glutamine-rich (Sfpq)にかかわる転写因子群について検討を行ってきた。 Sfpqをノックダウンすると白色脂肪細胞分化が抑制されることが判明している。electroporation法によって特異的small interfering RNAを3T3-L1前駆脂肪細胞に導入した。その後白色脂肪細胞への分化を誘導し、白色脂肪細胞分化早期あるいは分化後期の転写因子群において、Sfpqのノックダウンによる変化を検討した。白色脂肪細胞分化早期に誘導される因子群としてCebpb, Cebpd, Krox20などが知られており、Sfpqをノックダウンすることでこれらの因子群の遺伝子発現が減少することが定量的PCRで示された。また、分化後期に誘導される因子であるPparg, Cebpa, Fabp4についても遺伝子発現が抑制された。これまでの成果についてまとめた論文を2022年6月に発表した。既報ではSfpqとmRNAスプライシングやそれにかかわる因子群との連携についても報告されていることから、Sfpqをノックダウンした場合のエクソンの変化を検討することとした。siRNAによりSfpqノックダウンを行い、得られた検体についてサンプル数を増やしてRNAシークエンス解析を実施した。コントロールと比較して、有意差を持ってスプライシングに変化のある複数の脂肪代謝に関連する因子を抽出した。今後その解析を進め、関連する因子とSfpqの関連について検討する予定である。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 3: やや遅れている理由家族や自分自身の体調不良を経験し、またCOVID19やインフルエンザの罹患を経験し、ときによって業務の優先順位を下げて家族と自宅で過ごす機会が増えたため。
今後の研究の推進方策	サンプル数を増やしたシークエンス解析の結果を統計的に処理し、関連分子の相関を把握する。また、Sfpqによりスプライシングが制御され、さらにそのアイソフォームが脂肪細胞分化に重要と思われる分子について、個別の検討を行う。定量的PCRをもちいて、実際にアイソフォームが変化していることを確認する。続いて該当スプライシング領域の機能の検討を行う。さらにSfpqがスプライシングに変化を及ぼすこと、またどのような因子と関連して脂肪細胞分化に関与するかを検討する。
次年度使用額が生じた理由	サンプル数を増やしてRNAシークエンス解析を行ったため、この解析結果を踏まえ、qPCR関連および細胞培養関連の試薬が必要である。