単一細胞解析を基盤にしたアルドステロン合成機構の解明と創薬標的因子の同定

2021 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 19K17964
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 一町 澄宜 広島大学, 病院(医), 助教 (00805666)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: 原発性アルドステロン症 / 高血圧

研究実績の概要

KCNJ5 L168R変異変異が同定されたアルドステロン産生腺腫（APA）検体においてFluidigm C1 Single-Cell Auto Prepシステムを用いてシングルセル解析を行い、KCNJ5変異APAにおけるKCNJ5変異をもたない細胞 (wild type)でのアルドステロン合成機構に関わる候補因子Aを選抜した。候補因子AのAPA組織における蛋白発現の局在を検討するため、KCNJ5変異およびその他既知の遺伝子変異をもつ、あるいは既知の遺伝子変異もたないAPAにおける免疫組織染色を行ったが、APA腫瘍部において候補因子Aの発現は認められなかった。また、遺伝子変異の違いによる候補因子Aの発現差異は認められなかった。アルドステロン合成に関わる細胞接着因子の機能解析 (In vitro解析)を行うため、副腎皮質癌細胞株（HAC15）に候補因子Aを過剰発現させステロイド合成酵素やアルドステロン合成に与える影響を検討した。コントロール群と比較して候補因子Aの過剰発現群では、HAC15のアルドステロン合成量やアルドステロン合成酵素（CYP11B2） mRNA発現量に変化を認めなかった。アルドステロン合成以外にAPAの腫瘍化など候補因子Aが関与する創薬標的因子となり得る機序を推定するため、HAC15における候補因子Aの過剰発現群、コントロール群のRNAを用いてRNA-seq解析を行っており、現在結果を解析中である。

研究成果

• [雑誌論文] Hypomethylation associated vitamin D receptor expression in ATP1A1 mutant aldosterone-producing adenoma (2022)
  • 著者名/発表者名: Nanao Yuta、Oki Kenji、Kobuke Kazuhiro、Itcho Kiyotaka、Baba Ryuta、Kodama Takaya、Otagaki Yu、Okada Akira、Yoshii Yoko、Nagano Gaku、Ohno Haruya、Arihiro Koji、Gomez-Sanchez Celso E.、Hattori Noboru、Yoneda Masayasu
  • 雑誌名: Molecular and Cellular Endocrinology 巻: 548 ページ: 111613～111613
  • DOI: 10.1016/j.mce.2022.111613
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] ATP1A1 Mutant in Aldosterone-Producing Adenoma Leads to Cell Proliferation (2021)
  • 著者名/発表者名: Kobuke Kazuhiro、Oki Kenji、Gomez-Sanchez Celso E.、Gomez-Sanchez Elise P.、Itcho Kiyotaka、Ohno Haruya、Nagano Gaku、Yoshii Yoko、Baba Ryuta、Kodama Takaya、Arihiro Koji、Hattori Noboru、Yoneda Masayasu
  • 雑誌名: International Journal of Molecular Sciences 巻: 22 ページ: 10981～10981
  • DOI: 10.3390/ijms222010981
  • 査読あり / 国際共著