| 研究課題/領域番号 |
19K18297
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
黒田 浩佐 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (50624409)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | HRG / 高ヒスチジン糖タンパク / バイオマーカー / 術後合併症 / ELISA |
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| 研究実績の概要 |
我々は、高ヒスチジン糖タンパクHistidine-Rich Glycoprotein (HRG)に注目している。本研究では、さまざまな手術を受ける患者を対象とし、HRG値の周術期における変動を調査する。当初の研究計画では、2019年度前半で、研究プロトコルの作成、倫理委員会承認などを経て研究開始し、2019年度後半で実際に患者検体の収集を開始する予定であった。
しかし、HRG測定に関して大きな問題が生じた。測定には自家製のELISA法を用いているが、これは我々が先行研究時に確立した方法であり、ニッケル－ニトリロ三酢酸（Ni-NTA）を用いる点が特徴であった。具体的には、いわゆる2次抗体の代わりに、Qiagen社のNi-NTA HRP Conjugateという製品を用いていた。しかし、この製品が生産中止となってしまい、2019年夏には入手困難となった。したがって、代替品を選び、それを用いて以前の方法と同様にHRG測定を行うことができるどうかを評価する必要が生じた。Qiagen社のNi-NTA HRP Conjugate の代替品としてはThermo社のHisProbeがあり、精製したHRGタンパクを用いた検証実験ではまずまずの反応性を得ることができた。しかし、実際の血漿検体では安定してHRG値測定を行うことができず、さらなる変更を加える必要があった。最終的には、96-well plateの変更（Corning社のCOSTAR 3590からThermo社NUNC MAXISORP）と、自動プレート洗浄機の導入によって、安定した測定が可能となった。
HRG測定法を改良すると同時に、研究プロトコル作成をすすめ、岡山大学病院麻酔科蘇生科内の臨床研究カンファレンスに複数回諮ることで、研究計画の確定をすすめている。2020年度早々に、岡山大学病院倫理委員会へ申請する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
当初の研究計画では、2019年度前半で、研究プロトコルの作成、倫理委員会承認などを経て研究開始し、2019年度後半で実際に患者検体の収集を開始する予定であった。しかし、HRG測定に関して大きな問題が生じた。測定法として自家製ELISA法を用いているが、ニッケル－ニトリロ三酢酸（Ni-NTA）を用いる点が特徴であった。具体的には、いわゆる2次抗体の代わりに、Qiagen社のNi-NTA HRP Conjugateという製品を用いていたが、この製品が生産中止となってしまい、2019年夏には入手困難となった。したがって、代替品を選び、それを用いて以前の方法と同様にHRG測定を行うことができるかｔｔどうかを評価する必要が生じた。代替品としてはThermo社のHisProbeがあり、精製したHRGタンパクを用いた検証実験ではまずまずの反応性を得ることができた。しかし、実際の血漿検体では安定してHRG値測定を行うことができず、さらなる変更を加える必要があった。最終的には、96-well plateの変更（Corning社のCOSTAR 3590からThermo社NUNC MAXISORP）と、プレート洗浄機の導入によって、安定した測定が可能となった。
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| 今後の研究の推進方策 |
2019年度内で測定法の改訂はほぼ完了したと考えている。また、研究計画書の概要に関しては既に固まっており、2019年度中に岡山大学麻酔科蘇生科内の臨床研究カンファレンスで複数回の議論を行っている。
今後の方策としては、2020年度第一四半期に研究計画書の詳細を詰め、プロトコルを確定させ、岡山大学病院倫理委員会の承認を得る。第二、三四半期には患者登録を開始し、検体採取を行う。第三、四四半期でHRG値の測定を行い、データを確定させる。データ確定後に解析を行い、結果を考察する。
研究推進のため、研究協力者や岡山大学麻酔科蘇生科の臨床研究コーディネータと適宜会議を行い、情報共有、方針の確認を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究が、当初計画より遅れており、検査外注費用やデータベース作成・維持費用に関する全てが次年度へ持ち越しとなった。
2020年度第二四半期以降で患者登録を開始できる予定であり、以後は検査の外注費（1検体につき5,000円×150検体程度）およびデータベース作成維持費として使用する。また、学会参加などを行い、情報収集に努める。
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