| 研究課題/領域番号 |
19K18371
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| 研究機関 | 兵庫医科大学 |
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研究代表者 |
井上 岳人 兵庫医科大学, 医学部, 研究生(研究員) (30772652)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | セルトリ細胞 / アポトーシス / エンドトキシン / 急性炎症 / デスレセプター経路 / インターロイキンー18 / 精巣 |
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| 研究実績の概要 |
我々は急性炎症時に精巣内で発現が上昇する過剰なIL-18により生殖細胞およびライディッヒ細胞のアポトーシスが誘起される可能性を示してきた。また、精巣内のIL-18産生細胞に着目すると、ライディッヒ細胞やセルトリ細胞では炎症刺激下でIL-18の発現は増加せず、マクロファージではIL-18の発現が増加することを明らかにした。令和2年度は、マウスセルトリ細胞由来TM4細胞を用いてin vitroでリコンビナントIL-18（rIL-18）で刺激（12、18および24時間）を行い、セルトリ細胞のアポトーシスシグナル伝達経路関連因子の発現に変化があるか経時的に検証した。結果、高濃度のrIL-18で刺激した場合でも、セルトリ細胞のIL-6等の炎症性サイトカインの発現は全刺激時間区で増加せず、セルトリ細胞の炎症反応が惹起されなかった可能性が示唆された。また、デスレセプター経路関連因子の発現の増加も見られなかったことから、高濃度のrIL-18刺激下においても、セルトリ細胞のアポトーシスが誘起されない可能性が示唆された（高濃度のrIL18刺激下でのライディッヒ細胞では炎症反応が惹起され、デスレセプター経路関連因子の発現が増加し、アポトーシスが誘起された）。従って、急性炎症下での精巣内のIL-18濃度が上昇した場合でも、生殖細胞やライディッヒ細胞とは異なり、セルトリ細胞ではIL-18の影響を受けにくい可能性が考えられた。本研究により、次の研究課題である「IL-18中和抗体投与と敗血症モデルマウスの精巣細胞に及ぼす影響」に取り組むための基礎となる結果が得られた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
下記に示すように、研究計画に変更が生じている。
① rIL-18刺激時間に関して、当初予定していた12時間では高濃度のrIL-18で刺激するもデスレセプター（TNFR1およびFas）の発現が上昇しなかったため、刺激時間を延長し発現を確認した。
② 令和2年度から敗血症モデルマウスにIL-18中和抗体を投与する研究を開始する予定であったが、IL-18とセルトリ細胞の関係性の検証（上記①）に重きを置くこととしたため、遂行できなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
＜IL-18とセルトリ細胞のアポトーシスシグナル伝達経路との関係性の検証＞rIL-18の刺激によりセルトリ細胞由来TM4細胞の炎症反応は惹起されず、デスレセプター経路関連因子の発現も増加しなかった。当該研究で得られた検体のタンパク発現の解析を引き続き実施する予定である。またrIL-18の刺激により炎症反応が惹起されなかったことから、IL-18レセプターの発現の解析をする予定である。
＜敗血症モデルマウスにIL-18中和抗体を投与することにより精巣生殖細胞のアポトーシスを抑止できるか検証する＞雄性9-10週齢C57BL/6JマウスにLPSを腹腔内投与し、エンドトキシン血症マウスを作製する。1時間毎にマウスの行動観察をし、昏睡状態やその後の回復状態により急性期モデルおよび回復期モデルを判断する。IL-18中和抗体投与によりエンドトキシン血症モデルマウスの精巣生殖細胞のアポトーシスを抑制できるか検証する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
「IL-18とセルトリ細胞のアポトーシスシグナル伝達経路との関係性の検証」の研究計画を変更したことから、令和2年度開始予定をしていた「敗血症モデルマウスにIL-18中和抗体を投与することにより精巣生殖細胞のアポトーシスを抑止可能か」検証する実験が開始できておらず、当該実験に関する予算が未使用となり次年度使用が生じた。次年度は当初予定していた動物実験を行うための動物・試薬等の購入に使用していく。
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