| 研究課題/領域番号 |
19K18401
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
佐藤 瑞仁 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 助教 (70836759)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 脊索腫 / 骨破壊 / 破骨細胞 / 骨芽細胞 / リモデリング |
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| 研究実績の概要 |
脊索腫は斜台や仙骨に生じる骨破壊性の腫瘍であり、あらゆる集学的治療を行っても根治することは困難な難治性疾患である。、腫瘍周囲の骨を破壊しながら局所浸潤するため、臨床的に悪性度は高い。現在までに腫瘍細胞の増殖を抑える治療は、複数開発されているが、骨破壊によって生じる脳神経麻痺が患者の日常生活動作に大きく影響するため、骨破壊の機序を解明することは新規治療の開発には必須である。現在までに解明された脊索腫の骨破壊機序はなく、申請者は予備実験にて、破骨細胞以外の骨破壊機序が存在する可能性を確認している。脊索腫細胞にタンパク質分解酵素マトリックスメタロプロテアーゼ13（MMP-13）が、骨破壊に関与していることが示唆された。さらに、脊索腫の浸潤したヒト斜台をマイクロCTで解析し骨密度の低下を認め、さらに酸性環境が骨破壊と関与している可能性も示唆され、実際のヒト脊索腫培養細胞においても細胞内に酸性顆粒の存在が示唆されている。本研究において、脊索腫における骨破壊の機序を解明し、それを標的とした新たな治療戦略を提言することを目的とする。本年度は、引き続き複数のヒト脊索腫培養細胞を用いた観察、ヒト脊索腫組織標本を用いた解析を進めた。in vivo modelの樹立に関しては、やや難渋したが結果の再現性を確保するための実験を続けている。結果の再現性が得られれば、病理組織学的解析及びin vitroでの検討で得られた骨破壊機序の仮説をin vivo modelで検証する。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度はヒト脊索腫病理組織学的検体において、CathepsinKやMMP-13などのタンパク質分解酵素の発現解析をささに進め、MMP-13に関しては検体間で発現強度に差があり、臨床経過と関連している可能性を得た。以上の結果を論文報告としてまとめている最中である。ヒト脊索腫細胞株を用いたin vivoモデルの作成では、頭蓋冠、仙骨への移植では生着が不安定であったため、コラーゲンスポンジ上で培養した細胞の頭蓋冠への移植や、仙骨への移植を行った。頭蓋冠への移植は生着したマウスしなかったマウスがおり、再現性を得る事に難渋した。仙骨への生着は頭蓋冠より確率は高いが、より骨近傍への確実な生着を目指すための工夫が必要と考え実験を続けている。
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| 今後の研究の推進方策 |
保有する病理組織標本を用いた解析は現在論文化に向けまとめはじめているため、今後は脊索腫細胞株を用いたin vitro解析、同時にin vivo modelの安定化、及び骨破壊機序のin vivo modelでの検証をさらに試みる。保有する脊索腫細胞株にffLuc(Venus蛍光タンパク質とLuc2ホタルルシフェラーゼの融合遺伝子)発現レンチウイルスベクターを感染させ、セルソーターにより、ffLucが安定高発現する細胞株は単離済みであり、引き続きそれを用いNOD/SCIDマウスの頭蓋冠、仙骨に移植する。移植方法を昨年度から複数考案しており、移植細胞数含め、生着の確実性含め最適な移植法を探索する。未だ確実に骨破壊像が得られる脊索腫 in vivo modelは定まっていないため、樹立できれば非常に意義深い。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
（理由）効果的に物品調達を行った結果であり、次年度の研究費と合わせて試薬・消耗品などの購入に充てる予定である。
（使用計画）次年度は、より細胞培養、及び動物実験を行っていく、その上でまず動物購入・飼育費に費用がかかる。本治療計画はヒト細胞を用い、NOD/SICD mouseを用いねば生着は困難であることは既に我々の検討で明らかとなっている。以上含め、その他、培養関連試薬、組織解析の関連試薬を中心に購入予定である。
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