2020 年度実施状況報告書

脳梗塞に対する脂肪細胞由来幹細胞移植投与方法の確立と健側の役割の解明

研究課題

研究課題/領域番号	19K18432
研究機関	長崎大学
研究代表者	定方英作長崎大学, 病院(医学系), 医員 (10772139)
研究期間 (年度)	2019-04-01 – 2022-03-31
キーワード	再生医療 / 脂肪幹細胞 / 脳梗塞
研究実績の概要	230～280gのSparague-Dawley種のラットを使用し、総頚動脈より4-0ものフィラメント糸を挿入し中大脳動脈閉塞モデルを作成した。80分経過後にフィラメントを除去し再開通させ、24時間後にヒト脂肪細胞由来幹細胞(ADSCs)の投与を行った。ポリエチレンカテーテルを用いて細胞数を100万個、1000個に振り分けて脳梗塞と同側の頸動脈から緩徐に投与を行った。投与モデル間におけるFunctional recovery 、梗塞サイズの検討した。まず投与後から投与28日後までmNSSをとり、神経機能の改善を投与細胞群間で比較検討を行った。細胞投与群ではコントロール群と比較して神経機能の改善がみられ、投与細胞群間でも高量の細胞を投与した群の方が神経機能改善がみられた。脳梗塞巣のサイズの評価ではventricle sizeやcortical atrophyの定量を行った。細胞投与28日後に4%PFAの還流固定を行い脳組織を摘出し、cryostatを用いて30μmm sliceを作成した。等間隔に5切片をセレクトし、20％ cresyl iolet溶液を用いて染色を行った。ventricle sizeやcortical atrophyの定量をImage Jを用いて評価した。細胞投与群ではコントロールと比較して有意に脳梗塞巣の縮小が得られた。細胞投与群では統計的な差は見られなかったが、high dose群で脳梗塞巣の縮小が得られた。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 4: 遅れている理由コロナウイルス感染流行に伴い、職場異動と重なり、コロナウイルス感染症の診療に従事することが増えてしまったため予定していた免疫染色が行えず、試薬などの購入が行えなかったため差額が生じてしまった。実験が行えなかったため、染色などを依頼するための人件費が抑制されてしまった。今年度は実験を進めるため、免疫染色などを委託する予定であり、試薬や人件費として使用する予定である。また、コロナウイルス感染症のため学会がweb開催になってしまい、現地への出張がなかったため旅費の使用がなかった。徐々にコロナウイルス感染症が落ち着きつつあるため、演題登録を行い学会発表のため出張を予定している。
今後の研究の推進方策	行えていなかった免疫染色を行い、実験を進めていく。また、細胞投与後3日、7日目の検体も必要と考えられるため追加実験を行う予定である。
次年度使用額が生じた理由	コロナウイルス感染流行に伴い、職場異動と重なり、コロナウイルス感染症の診療に従事することが増えてしまったため予定していた免疫染色が行えず、試薬などの購入が行えなかったため差額が生じてしまった。実験が行えなかったため、染色などを依頼するための人件費が抑制されてしまった。今年度は実験を進めるため、免疫染色などを委託する予定であり、試薬や人件費として使用する予定である。また、コロナウイルス感染症のため学会がweb開催になってしまい、現地への出張がなかったため旅費の使用がなかった。徐々にコロナウイルス感染症が落ち着きつつあるため、演題登録を行い学会発表のため出張を予定している。