ゲノム編集法を用いた関節リウマチ滑膜におけるサバイビンバリアントの役割の解明

2020 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 19K18499
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 茂久田 翔 広島大学, 病院(医), 研究員 (80837162)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2023-03-31
• キーワード: 関節リウマチ / サバイビン / スプライスバリアント

研究実績の概要

サバイビンは、アポトーシスを抑制する因子であり、腫瘍細胞で発現が増加している。サバイビン2B（サバイビンのバリアントの一種、霊長類特異的）は、活動性の高い関節リウマチ滑膜（特に線維芽細胞）に多量に発現しており、細胞の増殖を促す役割を持つ。本研究では、関節リウマチの病態制御を最終目標とし、滑膜増殖のメカニズムの解明、増殖を抑制するための新規治療法の開発を目指している。以下に示すように、種々のアプローチを行っている。（１）初代培養の線維芽細胞を対象に、DNAやRNAなど各種生物学的情報単体の細胞内への導入法について検討している。CRISPR/Cas9に加え、増殖を制御しうる各種遺伝子の導入法を検討した。現在も検討を続けている。（２）サバイビンの調節因子として、ルシフェラーゼアッセイを用いて各種転写因子が発現にどのように影響するかを検討した。SOX9やFOSなどが候補遺伝子として抽出されたものの、2020年度の実験では再現性のあるデータを得ることは困難であった。現在も検討を続けている。（３）サバイビンの調節因子として、マイクロRNAの関与も検討した。データベース検索によって候補となるマイクロRNAが抽出された。これを細胞に導入してウエスタンブロットで検討した結果、マイクロRNAの導入によって細胞内のサバイビン蛋白が減少する可能性があると考えられた。マイクロRNAの内因性の発現の有無や生物学的機能などについて、今後の検討が必要と考えられた。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

関節リウマチ滑膜の研究には、患者滑膜検体があることが望ましいが、COVID-19の影響で本邦での手術件数が減少している。また、2020年3月下旬以降、当研究室においても断続的に自粛体制をとったため、実験の進行は遅れている。今後もCOVID-19の状況によって、研究の遅れが予想される。

今後の研究の推進方策

COVID-19の影響を考慮しつつ、可能な範囲での検討を行う。過去の手術症例について、滑膜検体のパラフィンブロックが保管されているため、組織切片を用いた研究で不足分を補うことを計画している。また、患者検体によらない実験（CRISPR/Cas9法、ルシフェラーゼアッセイ、ウエスタンブロットなど）については、今後も継続して実験を行う。いずれの実験についても、COVID-19の影響で研究室の使用が制限された場合には、進行が困難となる場合が予想される。

研究成果

• [雑誌論文] C-reactive protein and ground-glass opacity as predictors for intractable interstitial lung disease in patients with systemic sclerosis under cyclophosphamide treatment regardless of concomitant glucocorticoids (2021)
  • 著者名/発表者名: Yusuke Yoshida, Tomohiro Sugimoto, Yohei Hosokawa, Harumichi Suma, Hiroki Kobayashi, Michinori Ishitoku, Hiroki Kohno, Tadahiro Tokunaga, Hirofumi Watanabe, Sho Mokuda, Takaki Nojima, Shintaro Hirata, Eiji Sugiyama
  • 雑誌名: Modern Rheumatology 巻: ahead of print ページ: ahead of print
  • DOI: 10.1080/14397595.2021.1907014.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Tapering and discontinuation of oral glucocorticoids without deterioration of disease status in patients with rheumatoid arthritis under a stable treatment (2021)
  • 著者名/発表者名: Shintaro Hirata, Hiroki Kohno, Hirofumi Watanabe, Tadahiro Tokunaga, Yusuke Yoshida, Tomohiro Sugimoto, Sho Mokuda, Keisuke Oda, Takaki Nojima, Eiji Sugiyama
  • 雑誌名: Modern Rheumatology 巻: ahead of print ページ: ahead of print
  • DOI: 10.1080/14397595.2020.1864914.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Rapid changes of nailfold capillary abnormalities during treatment for a patient with dermatomyositis complicated by lung cancer: a case report (2021)
  • 著者名/発表者名: Tomohiro Sugimoto, Sho Mokuda, Kakuhiro Yamaguchi, Kei Araki, Hiroki Kohno, Yusuke Yoshida, Shintaro Hirata, Noboru Hattori, Eiji Sugiyama
  • 雑誌名: Modern Rheumatology Case Reports 巻: 5 ページ: 95-100
  • DOI: 10.1080/24725625.2020.1826650.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Asymptomatic coronary aneurysms in a patient with eosinophilic granulomatosis with polyangiitis who developed a digital gangrene (2021)
  • 著者名/発表者名: Mayu Sato, Yusuke Yoshida, Tomohiro Sugimoto, Shinji Kishimoto, Takuji Omoto, Hirofumi Watanabe, Tadahiro Tokunaga, Kazutoshi Yukawa, Hiroki Kohno, Sho Mokuda, Takaki Nojima, Shintaro Hirata, Eiji Sugiyama
  • 雑誌名: Modern Rheumatology Case Reports 巻: 5 ページ: 130-136
  • DOI: 10.1080/24725625.2020.1810404.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Lower CH50 as a predictor for intractable or recurrent lupus enteritis: A retrospective observational study (2021)
  • 著者名/発表者名: Yusuke Yoshida, Takuji Omoto, Hiroki Kohno, Tadahiro Tokunaga, Tatsuomi Kuranobu, Kazutoshi Yukawa, Hirofumi Watanabe, Katsuhiro Oi, Tomohiro Sugimoto, Sho Mokuda, Takaki Nojima, Shintaro Hirata, Eiji Sugiyama
  • 雑誌名: Modern Rheumatology 巻: 31 ページ: 643-648
  • DOI: 10.1080/14397595.2020.1812871.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Angiotensin-converting Enzyme 2, a SARS-CoV-2 Receptor, Is Upregulated by Interleukin 6 through STAT3 Signaling in Synovial Tissues (2020)
  • 著者名/発表者名: Sho Mokuda, Tadahiro Tokunaga, Junya Masumoto, Eiji Sugiyama
  • 雑誌名: The Journal of Rheumatology 巻: 47 ページ: 1593-1595
  • DOI: 10.3899/jrheum.200547.
  • 査読あり / オープンアクセス