| 研究課題/領域番号 |
19K18644
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
古宇 家正 広島大学, 病院(医), 講師 (10794779)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 卵巣粘液性癌 / CDX2 / Reg IV |
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| 研究実績の概要 |
卵巣粘液性癌において、薬剤耐性に関する CDX2 の標的遺伝子として MDR1 に加えて Reg IV の発現調節を確認し、関連する EGFR/Akt/AP-1 シグナリング経路の活性とアポトーシスの抑制を解析する。新規レジメンとして、5-フルオロウラシル（5-FU）の有効性と抗 EGFR 抗体の効果を確認し、CDX2 をバイオマーカーとした個別化治療の確立を目的とする。
まず臨床検体を使用し、免疫組織化学染色法によって、卵巣粘液性癌の高分化型と中分化型で CDX2 と Reg IV がともに発現していることを確認した。しかし、低分化型では CDX2 も Reg IV も発現を認めなかった。
次に卵巣粘液性腺癌細胞株を使用し、実験に使用する細胞株を選択するために、内因性の CDX2, REG4 の発現を確認した。OMC-1 細胞では CDX2 と REG4 の発現を認め RNA干渉による発現の抑制を行い、OMC-3 細胞では CDX2 の発現を認めずレトロウイルス感染による遺伝子導入によって強制発現させた。OMC-1 細胞で、CDX2 の発現は 2種類の siRNA oligo によって抑制され、それに伴い REG4 の発現も抑制されていることが RT-PCR でも WB法でも確認された。さらに、OMC-3 細胞に CDX2 を遺伝子導入 (OMC-3/PGS-CDX2 細胞) し、CDX2 の発現が増強したことによる REG4 発現の増強を RT-PCR でも WB法でも確認された。
以上より、卵巣粘液性腺癌の分化型による CDX2 と Reg IV の発現に相関性があると考えられ、CDX2 を介して REG4 の発現を調節している可能性がある。今後、関連する EGFR/Akt/AP-1 シグナリング経路の活性とアポトーシスの抑制を解析し、新規レジメンを検討していく。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
卵巣粘液性癌において、薬剤耐性に関する CDX2 の標的遺伝子として MDR1 に加えて Reg IV の発現調節を確認し、関連する EGFR/Akt/AP-1 シグナリング経路の活性とアポトーシスの抑制を解析する。新規レジメンとして、5-フルオロウラシル（5-FU）の有効性と抗 EGFR 抗体の効果を確認し、再発時や薬剤耐性獲得時の CDX2 の発現変化も確認していく予定であり、順調に進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
Reg IV が EGFR/Akt/AP-1 経路を通してアポトーシスに関与しているため、卵巣粘液性癌細胞株において CDX2 の遺伝子導入による Reg IV を介した EGFR/Akt/AP-1 シグナリング経路の発現変化を western blot で確認する。さらに Bcl-2、Bcl-xl、survivin の発現とアポトーシスへの影響を確認し、5-FU の効果との関連を検討する。
CDX2 をバイオマーカーとした新たな化学療法レジメンとして、大腸癌の標準レジメンである 5-FU を中心とした化学療法が有効である可能性がある。レトロウイルス感染によって卵巣粘液性癌細胞株に CDX2 を遺伝子導入することで、5-FU の効果の変化を MTS assay を使用し確認する。CDX2 の発現を介して EGFR/Akt/AP-1 シグナリング経路の活性化があれば、抗 EGFR 抗体である分子標的治療薬（セツキシマブ）の効果を MTS assay によって確認し、抗 EGFR 抗体 による上乗せ効果を検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
臨床検体を使用した免疫組織化学染色法による実験、卵巣粘液性腺癌細胞株を使用した遺伝子導入実験やRNA干渉による実験は、既存の実験器具や薬品・消耗品を使用することで使用額を抑えることができた。また、同時に行う予定であった CDX2 の標的遺伝子の網羅的遺伝子解析実験を行えていないこともあり、次年度使用額が生じたと考える。
次年度に、本年度に行った実験の結果から関連する EGFR/Akt/AP-1 シグナリング経路の活性とアポトーシスの抑制を解析し、新規レジメンを検討していくのに加え、本年度に行う予定であった CDX2 の標的遺伝子の網羅的遺伝子解析実験に使用する予定である。
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