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本研究は光照射による生殖能の時間的制御マウスモデルを構築することを目的とする。これまで光CAS9における女性生殖器の生殖能を時間的に制御するin vivoモデル構築されていなかった。
昨年度まででLifを用いた光応答性CRISPR/CAS9による生殖能の時間的制御マウスモデルを作製し、分泌タンパク質Lifは外部補充によりレスキュー可能であることを証明できた。本研究における目的である生殖能の時間的制御マウスモデルの構築は達成した。本年度は、この成果を応用し、次にこのモデルを発展させ、子宮内膜症の発症病態マウスモデルの作製を目的とした。子宮内膜症モデルを作製するにあたり、現在、ヒト子宮内膜症患者に発現が高く認められている遺伝子として、Steroidogenic factor-1(以下SF-1)遺伝子に着目した。このSF-1と子宮内膜症の関連性は証明されていないが、発症原因の1つではないかと考えられる。まず光応答により強制的にマウスSF-1(mSF-1)を発現できるプラスミドの作製を行った。mSF-1を挿入するベクターとしてCAG駆動、Cre依存的なpAAVのベクターを使用した。このベクターは動物注入に適している。mSF-1をPCRで合成、サブクローニングベクターに挿入し、制限酵素処理後、Ligation法によりpAAV-FLEX-mSF-1を作製した。以前作成したTRE-PA-CreマウスとRosa26-tdTomatoマウスを交配させてTRE-PA-Cre：Rosa26-tdTomatoマウスを作製した。現在、このマウス(雌)の子宮にpAAV-FLEX-mSF-1をin vivoに強制発現する系を作製している。
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