| 研究課題/領域番号 |
19K18743
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| 研究機関 | 北里大学 |
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研究代表者 |
籾山 香保 北里大学, 医学部, 助教 (50748663)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 中咽頭癌 / HPV関連癌 |
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| 研究実績の概要 |
咽頭癌において、HPV関連および非関連癌でREV7発現との関連を調べることを目的として研究を開始した。これまで、卵巣癌や精巣癌、血液腫瘍などでREV7高発現が治療抵抗性の1つであることが示されている。中咽頭癌ではHPV感染の有無が明らかに治療感受性に関与し、ステージングにも採用されている。よって、まずは当院の中咽頭癌症例におけるREV7およびp16の発現を確認するため免疫染色を行った。結果として、p16陽性群で治療感受性が高いことが示されたが、REV7発現の有無では治療感受性に有意差は示されなかった。しかし、それぞれの発現に逆相関関係があることが示された。なお、ここまでの内容は頭頸部癌学会の基礎研究部門で発表した。他の癌腫のようにREV7発現と治療感受性、予後への影響の有意差を持つ関係は示されなかったが、もともとp16という強い規定因子があるためと考えられた。REV7発現による治療感受性の有意差は、現時点では示されなかった。中咽頭癌の治療で、特に化学放射線療法でのDNA修復にどのように関わり逆相関を示すのか検討するため、検体数を増やし同様に免疫染色を開始した。
細胞培養を比較的安定している口腔癌の細胞株を用いて行い、手技を獲得した。それらを用いて蛋白定量をウエスタンブロット法で行い中咽頭癌での手技に転換できるようにした。HPV関連頭頸部扁平上皮癌におけるREV7の発現の有無および増殖能・浸潤能・遊走能への影響を検討するため、p16陽性頭頸部扁平上皮癌の細胞株を購入し培養を開始した。増殖能・浸潤能・遊走能の評価を行うためのWST-8アッセイ・スクラッチアッセイ・浸潤アッセイのキットをそれぞれ購入し、前実験により手技獲得および実験条件の検討を行った。
REV7のノックダウンを今後行うため、購入したコントロールsiRNAおよび試薬を用いてp16陽性頭頸部扁平上皮癌細胞株のノックダウン条件を現在検討中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
新型コロナ感染症の影響で実験棟が使用できなかった期間があった。
REV7のノックダウンを今後行うため、購入したコントロールsiRNAおよび試薬を用いてp16陽性頭頸部扁平上皮癌細胞株のノックダウン条件を現在検討中であるが、他癌腫に比べ細胞株が安定せず条件付けが難しく時間を要している。
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| 今後の研究の推進方策 |
症例を増やしレトロスペクティブに行ったHPV関連癌とREV7発現（予後予測因子、治療感受性因子）の関係をまとめ、学会発表につなげていく。
また、p16陽性頭頸部扁平上皮癌の細胞株のREV7発現レベルを調べ、REV7陽性の細胞株に対しsiRNAを用いたREV7ノックダウンを行う。REV7発現レベルの評価およびノックダウンの効果確認はウエスタンブロット法で行う。
REV7ノックダウンによる増殖能・浸潤能・遊走能の変化をWST-8アッセイ・スクラッチアッセイ・浸潤アッセイにて検討する。
同様の実験をp16陰性中咽頭癌の細胞株でも検討中である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次年度はp16陽性頭頸部扁平上皮癌の細胞株のコントロールsiRNAを用いたノックダウン条件検討を引き続き行う予定である。p16陽性頭頸部扁平上皮癌の細胞株におけるREV7の発現レベル評価およびREV7のノックダウンにも取り組む予定である。
また、p16陰性中咽頭癌の細胞株の購入も検討している。
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