研究課題/領域番号 |
19K18812
|
研究機関 | 福島県立医科大学 |
研究代表者 |
川瀬 友貴 福島県立医科大学, 医学部, 助手 (10761968)
|
研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
|
キーワード | 喉頭乳頭腫 / 宿主リン酸化酵素阻害 |
研究実績の概要 |
本研究では次の3点を明らかにすることを目的としている。(1)喉頭乳頭腫のpatient-derived xenograftを作成する(2)喉頭乳頭腫の培養細胞モ デルを作成する(3)宿主のリン酸化酵素阻害による喉頭乳頭腫の抑制。 Patient-derived xenograftの作成では、手術により採取した喉頭乳頭腫組織を細切した後マトリゲルに懸濁し、超免疫不全マウスであるNSGマ ウス(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)の皮下に移植する。12週間観察し、腫瘍の生着が見られた場合、腫瘍を採取し同様の処置にて次代 のNSGマウスに移植する。安定して継代によりpatient-derived xenograftモデルとして確立する。 培養細胞の樹立では、手術により採取した喉頭乳頭腫組織を細切した後に、マトリゲルあるいはコラーゲンに包埋した状態で培養する。培養液 として、通常のDMEM等の他に、ケラチノサイト専用の培養液や、線維芽細胞によるフィーダーを設ける等の工夫も行う。上皮細胞の成長が確認 されればゲルごと採取し、培養液に懸濁後さらに次代の培養を行う。 癌やウイルスの研究において、種々のCDK阻害薬が利用可能である。Patient-derived xenograftでは、マウスにこれらのCDK阻害薬を投与し、 また培養細胞モデルでは培養液にこれらのCDK阻害薬を追加し、腫瘍あるいは細胞の増殖の抑制効果を確認する。さらに、腫瘍組織あるいは細 胞から蛋白質を抽出し、ウェスタンブロットによりRNAポリメラーゼIIのCTDのリン酸化についても併せて検証する。培養細胞ではフローサイト メトリーにより細胞周期への影響の有無についても確認する。ウェスタンブロットおよびフローサイトメトリーの実施にあたっては、予め喉頭 乳頭腫以外の商業ベースで利用可能な既知の培養細胞を用いて、種々のCDK阻害薬の効果を確認する。 本年度は(1)(2)を中心に研究を進めてきたが、patient-derived xenograftおよび培養細胞モデルの樹立には至っていない。
|
現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
本研究では次の3点を明らかにすることを目的としている。(1)喉頭乳頭腫のpatient-derived xenograftを作成する(2)喉頭乳頭腫の培養細胞モデルを作成する(3)宿主のリン酸化酵素阻害による喉頭乳頭腫の抑制。 本年度は(1)(2)を行ってきたが、いずれも樹立に至らず。今年度はこれらを解消し、(3)へ移行する必要がある。
|
今後の研究の推進方策 |
(1)喉頭乳頭腫のpatient-derived xenograftを作成する:Patient-derived xenograftの作成では、手術により採取した喉頭乳頭腫組織を細切した後マトリゲルに懸濁し、超免疫不全マウスであるNSGマウス(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)の皮下に移植する方法を予定しているが、細胞を移植する条件を検討中。 (2)喉頭乳頭腫の培養細胞モデルを作成する:培養液やフィーダーなどの調整が必要
|
次年度使用額が生じた理由 |
今年度はもともと予定していた、イメージアナライザー等の機器購入を行わなかったため、計画よりも使用額が少なかった。 次年度以降、機器の購入も含め予算を計上する。
|