| 研究課題/領域番号 |
19K18865
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| 研究機関 | 旭川医科大学 |
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研究代表者 |
宇都宮 嗣了 旭川医科大学, 大学病院, 助教 (50646065)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | ドライアイ / 角膜上皮細胞 / ANGPTL / シェアストレス |
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| 研究実績の概要 |
涙腺摘出や乾燥環境負荷などin vivoのドライアイモデルは多く存在するが、それらのモデルでは摩擦だけでなく炎症や浸透圧亢進など様々な要因が加わってしまい、実験結果の解釈を複雑にしてしまう。in vitroの実験モデルではそれらの因子は排除出来るが、定量的な実験を行うには特殊な実験系の構築が必要であ る。我々は平行平板型流れ負荷装置を用いた水流シェアストレスによって培養細胞に定量的に長時間にわたって機械的刺激を負荷する実験系を確立しており、こ の手法を培養ヒト角膜上皮細胞に応用し、瞬目の摩擦による角膜上皮への慢性的な機械的刺激を再現した。 網羅的遺伝子解析を行ったところ、シェアストレスを負荷した角膜上皮細胞では様々な遺伝子発現が変化していたが、ANGPTL4(アンギオポエチン様蛋白4)の遺伝子発現が圧倒的に上昇していた。シェアストレスを負荷した角膜上皮細胞ではWBにてANGPTL4蛋白も増加することがわかった。また、マウス角膜の免疫染色において 角膜上皮にはANGPTL4が高発現していることもわかった。現在のところ実際の生体角膜におけるANGPTL4の役割は不明であるが、マウス角膜の免疫染色においても 角膜上皮にANGPTL4が高発現していることから、ANGPTL4は角膜上皮において何らかの機能を持っている蛋白であることが示唆される。閉鎖された乾燥環境でマウスに送風することで、マウスにドライアイ環境を負荷するドライアイアイモデルを作成し、ANGPTL4の発現の変化を解析中である。また、眼瞼に粘性物質を塗布することで不快感から目を掻痒することによる、掻痒シェアストレス負荷モデルも作成し、現在解析中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
コロナウイルスによる不要不急な実験中止のため、実験が予定より遅延しており、予定より使用額が少なくなった。 予定していた実験を次年度以降に行うため、次年度以降に使用する予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
閉鎖された乾燥環境でマウスに送風することで、マウスにドライアイ環境を負荷するドライアイモデルを作成し、ANGPTL4の遺伝子や蛋白の発現の変化を解析していく。
また、眼瞼に粘性物質を塗布することで不快感から目を掻痒することによる、掻痒シェアストレス負荷モデルも作成し、ANGPTL4の遺伝子や蛋白の発現の変化を解析していく。
また、ANGPTL4 KOマウスにこれらの負荷をかけた時の変化を検討していく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
コロナウイルスによる不要不急な実験中止のため、実験が予定より遅延しており、予定より使用額が少なくなった。 予定していた実験を次年度以降に行うため、次年度以降に使用する予定である。
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