研究実績の概要 |
本研究では,Cre/loxP 発現制御システムを利用した遺伝子改変マウスを利用して,骨細胞特異的にEGFPを発現させたマウスを用いることにより,間葉系幹細胞から骨細胞への分化過程において特異的に発現する遺伝子の解明を目指す。加えて同マウスからiPS細胞を樹立し,骨系細胞分化時の変動遺伝子を詳細に解析することで,未分化細胞から骨細胞への分化・維持機構および,機能の制御機構の全容を明らかにすることを目的としている。 本年度は主に骨細胞特異型 EGFP発現マウスの作成を行い,遺伝子改変マウスより骨髄間葉系幹細胞 (BMSC) の採取ならびに骨細胞様細胞への分化誘導を行った。BMSCは骨分化誘導後2週間で培養細胞の一部にEGFPの発現を認めた。EGFP陰性細胞と比較して,EGFP陽性細胞では骨分化マーカーであるAlkaline Phosphatase, OsteocalcinのmRNA発現量の有意な亢進が認められた。EGFPを誘発するDmp1のmRNA発現は,EGFP陽性細胞でのみ認められ,陰性細胞では認められなかった。現在FACSを用いたフローサイトメトリーにて骨細胞様細胞の単離とDNAマイクロアレイによる遺伝子解析を行っている。 同時に遺伝子改変マウス由来iPS細胞の樹立も行っている。遺伝子改変マウス皮下組織より線維芽細胞を得たのち,Oct3/4, Sox2, Klf4, c-Mycの4遺伝子を導入し,iPS細胞様の形態をもつコロニーを確認した。現在PCR法による未分化性の確認と,奇形腫の形成による多能性の確認を行っている。
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