| 研究課題/領域番号 |
19K19161
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
石田 扶美 (田中扶美) 広島大学, 病院(歯), 歯科診療医 (60625979)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | Annexin |
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| 研究実績の概要 |
EMTや癌浸潤の観点から、癌細胞に対する周囲環境からの干渉と、癌細胞の周囲環境への介入によって、浸潤を含む癌の進展は修飾される。本研究では扁平上皮の基底細胞に発現し、そして血管内皮細胞においてアンギオジェネシスの初期に関与するとされるAnnexin A8を中心にEMTを介した口腔癌細胞の浸潤のバリエーションと強度形成のメカニズムを解析することを目的とする。実績の概要は以下のとおりである。
1） Snailをマスター分子として、EMTは多段階に進行し、EMT強度を調節あるいは獲得する実験系を確立した。２） すなわち上皮形質を持つ口腔癌細胞OM-1の遺伝子発現プロファイルをSnailの遺伝子導入により可逆性EMT形質を示す遺伝子発現プロファイルを得た。3） さらにEMT強度が増強されたクローンの遺伝子プロファイルを得ることができ、Slugの発現亢進がEMT強度のキーとなることが判明した。4）これに伴い上皮形質を規定するスプライシング調整因子ESRPの発現変動プロファイルも変動した。5） Annexin A8のスプライシングアイソフォームは3種存在し、バリアント3はEMT強度の進行に伴い選択されなくなった。6）一方バリアント2は可逆的EMT段階では選択が亢進し、EMT強度が確定に伴い選択されなくなった。7）大変際立ったことに、バリアント1は可逆的段階より全く選択されず、バリアント２へのスプライシング変更がEMT開始に伴いAnnexin A8機能が変更されることが予測された。8）EMT進行に従いAnnexin A8の発現は減少するがバリアント２の発現が一時的に亢進する意義を現在検討している。
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| 現在までの達成度 |
現在までの達成度
2: おおむね順調に進展している
理由
RNAseq法により得た遺伝子発現プロファイルの獲得は、これまでに実施してきたマイクロアレイ法による遺伝子発現プロファイルの正確さを保証するとともに、さらに多くの遺伝子発現変動を網羅することができ研究の進展に絶大な力を発揮している。その一端として上皮形質をがん幹細胞性と分化制御する新たなマスター因子を同定することにも成功した。
Annexin A8の発現及びスプライシングを調整する因子としてはSnail下流で強力に発現制御を受ける, Slugの発現に依存したスプライシング調節因子ESRPの発現プロファイルを同定できた。
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| 今後の研究の推進方策 |
Snailをマスター分子として様々な下流分子に働きかけ、EMTが生じて癌は浸潤する。間質と境界線上にある基底細胞層に生理的に発現するAnnexinA8分子が癌細胞のEMT強度の変化を修飾する可能性をスプライシングバリアントそれぞれにつき検討する。EMT 進行度の異なった細胞株において三次元培養された疑似癌浸潤組織を蛍光免疫細胞・組織染色し各浸潤階のAnnexinA8スプライシングバリアントの発現の分布と強度の解析を行うために抗体ツールの開発も検討する。またアンギオジェネシスなどに関与する液性因子の遺伝子発現プロファイルに対するAnnexinA8発現、ノックダウンの影響を確定する。
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