2021 年度研究成果報告書

causal SNV探索を通じたApoA1遺伝子の新たな発現調節機構の解明

研究課題

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研究課題/領域番号	19K20175
研究種目	若手研究
配分区分	基金
審査区分	小区分59040:栄養学および健康科学関連
研究機関	筑波大学
研究代表者	會田雄一筑波大学, 医学医療系, 助教 (60752152)
研究期間 (年度)	2019-04-01 – 2022-03-31
キーワード	生活習慣病
研究成果の概要	まず、2つの異なるルシフェラーゼレポーターベクターの一方にプロモーター領域の参照配列を、もう一方に同じ領域でSNVを1つだけもつ配列を挿入し、これらをヒト細胞株にコトランスフェクションしてルシフェラーゼ活性の比率を評価した。次に、スクリーニングで選び出されたSNVのcis-elementに作用するtrans因子を探索するために、転写因子だけをゲノムワイドに網羅した発現ライブラリーTranscription Factor Expression Library（TFEL）を独自に構築し、発現クローニングを行った（TFEL scan法）。
自由記述の分野	応用健康科学
研究成果の学術的意義や社会的意義	血中HDLレベルを規定するcausal SNVの探索を目的に、TFEL scan法を用いてApoA1のプロモーター領域のSNVを解析した。同定された転写因子をヒト細胞株で過剰発現したところ、内因性のApoA1遺伝子の発現が増加した。ApoA1のプロモーター領域にあり、転写活性に影響を与えるSNVと、この部位に結合してApoA1遺伝子の発現を制御する転写因子を同定した。また、同定されたSNVがもたらす肝細胞での効果を検討するために、CRISPR/Cas9による相同組換え修復を利用してSNVを導入する実験系の構築を進めた。