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研究代表者が開発したボルナ病ウイルス（BoDV）ベクターは、中枢神経系細胞に持続的かつ効率的に導入が可能な革新的RNAウイルスベクターである。また、中枢神経系へは鼻腔より非侵襲的に送達させることが可能であり、脳神経疾患への適用が期待されている。本研究は、BoDVベクターの脳内への適用においてその安全性を高めることで、革新的な遺伝子治療技術として実用化を目指すものである。具体的には、BoDVベクターを生体内への導入後、ベクターゲノムに自己編集を誘導させることで、伝播能力あるいは複製能力を欠損した安全なウイルスベクターへと変化させる技術構築である。研究期間において、RNA編集酵素であるADAR2ならびにCas13を利用したBoDVベクターの改良を行った。これまでにADAR2のBoDVのゲノムへの編集活性について解析を行い、ADAR2がBoDVゲノムRNAに直接結合することで、ゲノム、特にウイルス遺伝子のＸ遺伝子領域にA-to-G変異を多く誘導することを明らかにした。これまでに、X遺伝子の配列を解析することにより、ADAR２により編集を受けやすい配列を推定した。また、その配列候補をベクターへと導入することで、編集型ベクターの作製を進めている。さらに、Cas13-ガイドRNAを発現させるカセット作製した。今後は、カセット配列をBoDVベクターに導入することでる自己切断するベクターの回収を進めるとともに、脳神経細胞での確認を行う。
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