導出リンパ管・集合リンパ管の作製とリンパ管形成に関わる因子の同定

2020 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 19K24252
• 研究機関: 金沢大学
• 研究代表者: 中島 由加里 金沢大学, 保健学系, 助教 (40846680)
• 研究期間 (年度): 2019-08-30 – 2021-03-31
• キーワード: 培養リンパ管 / リンパ浮腫 / 脂肪組織由来間葉系幹細胞

研究実績の概要

1．3次元培養によるリンパ管作製：脂肪組織由来間葉系幹細胞をC57BL6/Jから単離培養し、細胞積層法を用いて三次元培養にて毛細リンパ管作製を行った。細胞積層法とは、細胞表面にフィブロネクチンとゼラチンをコーティングし、細胞を積層させ、三次元培養を可能にする手法である。昨年度、細胞積層法を用いてリンパ管作製を試みたが、死細胞の割合が多く、これを改善するためにプロトコルの見直しを図った。今年度は、生細胞の割合増加を図るため、カルチャーインサートへの細胞接着率の向上、支持細胞として線維芽細胞との共培養、培地の配合等を検討し、安定してリンパ管が作製できるプロトコルを確立した。
2．リンパ管の立体構造の評価：リンパ管の管腔構造を立体的に観察するため、培養したサンプルをリンパ管内皮細胞マーカーであるLYVE-1の抗体を用いてホールマウント染色を実施し、共焦点蛍光顕微鏡にて観察した。しかしながら、ホールマウント染色では、LYVE-1の非特異的反応が強く、別のリンパ管内皮細胞マーカーであるPodoplaninを用いて立体構造の評価を実施している段階である。
3．導出リンパ管あるいは集合リンパ管の3次元培養：細胞比率、培地の配合等について検討中である。
4．リンパ管形成に関わる因子の探索：リンパ管内皮細胞からmiRNAを抽出し、これを培地に添加することでリンパ管形成が図られるか検討した。現在、具体的な因子を絞り込む段階であるが、市販のリンパ管内皮細胞の生存率・増殖率が悪く、この原因について調べているところである。

研究成果

• [雑誌論文] Effects of inhibition of lymphangiogenesis by the vascular endothelial growth factor receptor 3 (VEGFR-3) inhibitor, MAZ51 on full thickness wounds in mice. (2021)
  • 著者名/発表者名: Takada K, Nakajima Y, Urai T, Mukai K, Asano K, Okuwa M, Sugama J, Nakatani T
  • 雑誌名: Veins and Lymphatics 巻: 10 ページ: 9385
  • DOI: 10.4081/vl.2021.9385
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] 破格，リンパ管小孔，リンパ浮腫，静脈注射，筋肉内注射，皮膚創傷治癒の研究：我々が行ってきた研究の概要 (2020)
  • 著者名/発表者名: 中谷壽男，向井加奈恵，中島由加里
  • 雑誌名: Journal of Wellness and Health care 巻: 44 ページ: 1-10
• [雑誌論文] Novel Hyaluronate Lyase Involved in Pathogenicity of Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis (2020)
  • 著者名/発表者名: Nguyen VA, Ogura K, Matsue M, Takemoto N, Mukai K, Nakajima Y, Hoang TL, Iwata Y, Sakai N, Wada T, Hashimoto W, Okamoto S, Ichimura H
  • 雑誌名: Frontiers in Microbiology 巻: 11 ページ: 552418
  • DOI: 10.3389/fmicb.2020.552418
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Investigation of lymphedema resolution in mouse hindlimbs (2020)
  • 著者名/発表者名: Nakajima Y, Asano K, Mukai K, Urai T, Okuwa M, Sugama J, Nakatani T
  • 学会等名: 第40回日本看護科学学会学術集会
• [備考] 金沢大学医薬保健研究域保健学系 看護科学領域 臨床実践看護学講座 創傷看護技術学分野
  • URL: https://wmn.w3.kanazawa-u.ac.jp/