| 研究概要 |
私たちが発見したRafファミリーの新規のメンバーDX-Raf蛋白質群(DA-Raf, DB-Raf, DC-Raf)はいずれもキナーゼドメインを欠損し, Ras-ERKカスケードに拮抗作用を示すと考えられる. これらのメンバーについて, 次のことがらを明らかにした.
DA-Rafと同様に, DB-RafとDC-Rafが活性化Rasに結合することを, pull-downアッセイと免疫共沈法により明らかにした. またA-Raf/DA-RafのRas結合ドメインに,アミノ酸置換を引き起こすSNPが存在していた, このSNPによるアミノ酸置換によりDA-Rafは活性化Rasに結合できなくなり, ERKカスケードを抑制しなくなった. このことはDA-Rafががん抑制蛋白質である可能性を支持している.
NGFによるPC12細胞の神経細胞分化には, RasによるERKカスケードの強く一過的な活性化から, M-Rasによる持続的な活性化への移行が不可欠である. このERKカスケードの活性化の移行過程で, DA-Rafの発現が上昇した. またDA-Rafの過剰発現やRNAiにより神経細胞分化が阻害された. これらの結果から, DA-RafはRasによるERKカスケードの強く一過的な活性化を阻害して, M-Rasによる持続的な活性化への移行に働いていると考えられる.
DX-Rafのメンバーを培養細胞に強制発現させると, いずれの場合にもアポトーシスが誘導された. また血清飢餓により線維芽細胞にアポトーシスを誘導する条件下で, DA-Rafの発現が誘導された. DA-RafはRas-ERKカスケードに拮抗し, BadのSer112の脱リン酸化と, caspase-3の活性化を引き起こした. したがって血清飢餓条件下で, DA-RafはRas-ERKカスケードに拮抗することによりアポトーシスを誘導すると考えられる.
マウスの形態形成および腫瘍形成におけるDA-Rafの関与を明らかにするために, DA-RafのKO ES細胞を樹立し, さらにKOマウスを作製した. これらのES細胞やKOマウスの表現型を解析して, 筋形成や神経形成および腫瘍形成におけるDA-Rafの機能を明らかにする.
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