| 研究概要 |
(1)染色体大規模欠失株の作製
大腸菌染色体大規模欠失株の作製を進める中で、野生株では欠失できた領域が大規模欠失株では欠失株が単離できないケースが出てきたので、これらの領域を解析するために新しい実験系を構築した。
(2)生育に必須な過程に関与する遺伝子群の機能解析
(ア)機能未知必須遺伝子の解析 : DNaseをコードすると予想される機能未知必須遣伝子yagFについて、高温感受性変異株から調製したプラスミドでは超らせん構造が変化していることを見出した。またYqgFタンパク質を精製して調べた結果、endonuclease活性が検出された。また遺伝学的解析により、転写に関与することが示唆され、DNAの正常な構造を維持することにより転写を正常に進ませる新規なメカニズムの可能性が考えられた。機能的に関連している三つの機能未知必須遺伝子yeaZ, ygjD, yieEについて、YgjDとYeaZが複合体を作ることを見出した。YgjD-YeaZ複合体を部分精製して調べた結果、種々のDNAを基質にした時に興味深いDNase活性が検出された。近年古細菌のホモログがAP endonucleaseであるとの報告があったが、遺伝学的解析からは支持する結果が得られず、これも転写に関与することが示唆された。
(イ)バイパスが存在する必須過程に関与する遺伝子群の同定、機能解析
染色体の約30%を欠失させた大規模欠失株の定常期における生存率が著しく低下している事を見出し、この性質が複数の遺伝子が欠損したことによることを明らかにしていたが、その原因遺伝子の一つとしてdpsを同定した。また増殖期の生菌率が低下していることもわかり、これも複数の遺伝子の欠損によるもので、やはりdps遺伝子の欠損が原因の一つであることがわかった。
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