| 研究概要 |
本年度は,以下の研究成果を得た.
1. DHFRループ変異体の内部運動性解析
初年度に引き続いてG67A,G67V変異体の内部運動性の解析をすすめた.本年度は,野生体とG67V,G67A変異体により誘導される内部運動性変化の再現性を含めた実験精度の検証を行うと同時に,内部運動速度の分布を精密に解析した.その結果,活性変調が観測されたG67Vでは,内部運動速度は750sec^<-1>を中心に分布しているが,活性変化の小さいG67Aと野生体は500sec^<-1>を中心とした速度分布を持っている.また,揺らぎを持つ構造部も,G67VはG67Aおよび野生体と異なっていることが分かった.構造揺らぎの速度・構造上の分布の違いが活性変調と関係することが示唆された.
2. ストップドフローを用いたDHFR変異体の反応速度変化
G67V変異体のkcatの低下がどのような反応ステップの変調によるかを解析した.その結果,hydride transfer速度は約20%低下していることが分かった,観測されたkcat変化の全てがhydride transfer過程の低下により説明されるものではないが,構造揺らぎの変化がhydride transfer過程にも影響を与えることを明らかにした.
|
