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これまで我々はATF-2遺伝子ファミリーメンバーの遺伝子ノックアウトマウスを作製して生理学的な機能をマウス個体を用いて解析してきた。 ATF-7遺伝子欠損マウスは音に対する驚愕実験とプレパルスインヒビション実験で異常を示し、セロトニンに関係する行動異常が見られた。 DNA マイクロアレーを用いた解析で、この時HTR5Bの発現が中脳の背側縫線核で大幅に亢進していることが明らかに成った。この事から、ATF-7は他のファミリーメンバーのATF-2やCRE-BPaとは異なり、本来転写をネガティブに制御している可能性が浮かび上がって来た。
今回、HeLa細胞を用いてFLA(G-HAタグの付いたATF-7を発現する細胞株を作製し、大量培養後、核抽出液から抗FLAG抗体と抗HA抗体を用いて、複合体を精製した。複合体の構成因子を質量分析によって同定した結果、ヘテロクロマチンを構成する因子やヘテロクロマチン形成に関与する因子が数種類同定された。
次に、ラット中脳の縫線核由来の神経細胞RN46Aの細胞抽出液をATF-7特異抗体で免疫沈降すると、ヒストンH3K9のトリメチル化酵素であるESETが供沈されてくる事が明らかに成った。また、ATF-7遺伝子欠損マウスではHTR5B転写調節領域のヒストンH3K9のトリメチル化が野生型と比較して有意に低下していた。
以上の結果から、ATF-7は核内で仲介因子mAMを介してH3K9のトリメチル化酵素であるESETをリクルートしてくる事によって、HTR5Bの遺伝子発現を抑制していると考えられる。現在、新たに見つけたヘテロクロマチン形成因子がどのようなメカニズムでH3K9のトリメチル化に関与して、ATF-7の標的遺伝子の転写抑制に関与しているのか解析を行っている。
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