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真核生物ではDNA損傷因子によって損傷や複製ミスが生じた場合、まず複製フォークの崩壊を防ぐ為にフォーク安定化因子によって複製フォークが安定化される。そして、チェックポイント因子によって細胞周期が停止され、修復因子によって複製ミスの修復が行われる。もし、チェックポイント機構が破綻すると、DNA複製の不備、染色体の不等分裂を起こし、細胞のがん化を誘発する。分裂酵母のDNA複製チェックポイント機構において、Mrc1はDNA複製停止に応答したRad3によるCds1のリン酸化を仲介するメディエーターとして働いている。本研究では、分裂酵母のDNA複製フォークの安定化維持機構を明らかにする為、分裂酵母Mrc1の複製フォークへの結合様式を解明することを日的とした。
我々はChIP法により、Mrc1は複製の進行に伴い複製フォーク上を移動するという結果を得た。更に、Mrc1の複製フォークへの結合はチェックポイント非依存的であり、複製フォーク安定化因子Swi1-Swi3依存的であることを明らかにしている。今回、Mrc1がDNA複製時に複製起点に結合するタイミングを複製開始に必要なcdc45やsld3の変異株を用いて解析した結果、アフリカツメガエルでのMrc1の機能ホモログClaspinの知見とは異なり、Mrc1はCdc45やSld3よりも早期に複製起点へリクルートされているという結果を得た。更に、Mrc1とSwi1はS期初期に複製開始を抑制した状態で、早期複製起点だけでなく後期複製起点にも結合しているという結果を得た。
以上の結果より、分裂酵母では複製フォーク安定化に働くMrc1、Swi1が、DNA複製開始前のORCやMCMから構成される複製開始前複合体が形成される時期には早期及び後期複製起点へリクルートされていることが正常なDNA複製開始抑制に必要であると考えられる。
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