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20年度は、L型グルコース誘導体の出発物質であるL-glucosamine、および2-NBDLGを始めとする各種L型グルコース誘導体合成法に関する論文発表、特許申請を行った。
L型グルコース誘導体を用いて、研究計画に記したような計測を行っていくためには、新規分子合成、試薬調整方法、検出器、検出方法、解析手法など様々な面からの検討が必要となる。20年度はこれら全てに着手し、具体的には後の論文で述べるが、それぞれ進展が見られた。特に大型で均質な細胞であるマウス受精卵による基本測定が役立っている。リアルタイムレーザー共焦点顕微鏡観察により、同一受精卵中の膜状態の良い割球はD型のみを取り込んだが、状態の悪い割球はD型のみならず、L型グルコース誘導体をも取り込んだ。また蛍光強度の時間的変化を追跡することで、蛍光グルコースの細胞膜面、膜中などへの非特異的吸着の程度、退色の度合い、細胞内での代謝による分解の速度など、これまでD型のみでは不明であった貴重なデータを、L型との比較により得ることができた。
当初計画を推進する目的で、急性単離した中脳黒質網様部GABA作動性神経細胞を対象として、共焦点顕微鏡上で37度にて溶液を潅流しながらL型蛍光グルコース投与前後の蛍光強度の差を、2-NBDGによる蛍光強度の差と比較し、基礎的データを取得した。神経活動に依存したグルコース取りこみなどを調べる為には、細胞の活動状態をパッチクランプ法により同時に計測することが求められるが、高速に動く3次元リアルタイム共焦点顕微鏡の振動により、観察中などにパッチピペットのシール状態が悪化する問題が生じた。顕微鏡ステージを新たに作成し、また種々のマニピュレーターを試し、改良を加えるなど改善を急いでいる。
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