| 研究課題/領域番号 |
20200006
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
山本 卓 広島大学, 大学院・理学研究科, 教授 (90244102)
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| 研究分担者 |
鈴木 厚 広島大学, 大学院・理学研究科, 准教授 (20314726)
西川 正俊 広島大学, 大学院・理学研究科, 研究員 (30444516)
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| キーワード | 発生・分化 / 遺伝子 / ゲノム / 発現制御 / ゆらぎ |
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| 研究概要 |
本年度は以下の通り研究を実施した。
1) 発生過程における遺伝子発現のゆらぎの解析…昨年度作製した2つの遺伝子(Ets, HesC)に対するzinc-finger nuclease (ZFN)をウニ胚に導入し、標的遺伝子の切断活性を調べたところ、標的配列への欠失変異あるいは挿入変異が確認できた。さらに、Ets遺伝子に対するZFNとレポーター遺伝子を共導入したところ、Ets遺伝子の発現する一次間充織細胞においてレポーター蛍光を観察することに成功した。
2) 細胞応答のゆらぎと細胞間相互作用に基づく細胞運命決定の解析…細胞運命の決定過程における"細胞応答のゆらぎ"を調べるために、動的な遺伝子発現のin vivo観察系を構築した。具体的には、中胚葉誘導因子・アクチビンに応答するMix2遺伝子プロモーターにルシフェラーゼ(Luc)遺伝子を連結したプラスミドをツメガエル胚の外胚葉細胞に導入した。アクチビン刺激後、Lucとルシフェリンの反応による発光イメージを、3～5分間隔で取得し、Mix2遺伝子の発現状態を約5時間(胞胚期から後期原腸胚期に相当)にわたってライブ観察することに成功した。
3) 多能性幹細胞における遺伝子発現のゆらぎの解析…核内受容体の発現をモニターするレポーター構築を組み込んだEC細胞を単離・継代することによって複数の安定発現細胞株の樹立に成功した。
4) トランスジェニックカエルを用いたホルモン応答性ゆらぎの解析…両生類の形態形成における遺伝子発現の揺らぎをin vivoでモニターするため、甲状腺ホルモン感受性プロモーターと各種レポーター遺伝子を組み込んだトランスジェニックガエル数種類のライン化を行った。
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