| 研究課題/領域番号 |
20200070
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| 研究機関 | 宮崎大学 |
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研究代表者 |
上地 珠代 宮崎大学, フロンティア科学実験総合センター, 研究員 (10381104)
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| 研究分担者 |
高柳 淳 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (80245464)
比嘉 三代美 琉球大学, 医学研究科, 助教 (20381105)
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| キーワード | RNA修飾 / 人工抗体 / SLE / ゼブラフィッシュ / 自己免疫疾患 / モルフォリノアンチセンスオリゴ / ノンコーディングRNA / ファージディスプレイ |
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| 研究概要 |
タンパク質に翻訳されないノンコーディングRNA(ncRNA)が生体内に多数存在する。これらのRNAは種々の修飾を受けているが、その意義は不明である。リボソームRNAには約200の修飾箇所があり、全身性エリテマトーデス(SLE)患者の血清からリボソームRNAに対する抗体が多数見つかっている。なぜこのような抗体ができるのかは明らかではない。私たちは、RNA修飾の有無が免疫活性化の原因になるのではないかと考えた。これを明らかにするために、RNA修飾を認識する抗体と修飾欠損モデルを作製し、生体システムにおけるRNA修飾の役割を分子レベルで解析することを目的とする。
1)抗RNA抗体の単離とヒト型IgG抗体の特異性の確認:ファージの抗体提示の効率を高めるために、抗原に対するスクリーニング法を改良した。また、よりRNA構造に特異的な抗体を選別するために、RNA抗原の標識をランダムから末端に変更した。その結果、U1 snRNAに対する抗体を提示するファージクローンを新たに8種類同定した。また、得られた抗体配列をIgG発現ベクターに組み込み、培養細胞を用いて、ヒト型IgGを大量生産する系を立ち上げた。
2)RNA修飾欠損モデル動物を用いた修飾の定量解析およびポリソーム解析:ゼブラフィッシュにおいて、アンチセンスオリゴを用いて3種類のsnoRNA遺伝子(SNORD26、SNORD44、SNORD78)の発現抑制胚を作製した。これらからrRNAを精製し質量分析装置を用いて、各遺伝子がガイドする修飾が特異的に低下することを確認した。また、異常なる修飾箇所によって、それぞれに特異的な表現型が現れることも確認した。
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