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1. Sox9の下流因子の探索
Sox9の下流因子をマイクロアレイ解析およびリアルタイムPCRで探索した結果、転写因子Osterixが軟骨細胞分化に伴って発現誘導されることが見いだされた。そこで、Sox9とOsterixの相互関係を検討するために、Runx2との時空間的関係を検索した。その結果、Osterixは、骨芽細胞分化と同様に、軟骨細胞においてもRuxn2により発現誘導されることが明らかとなった。さらにin situ
hybridization法によりOsterixの発現パターンを解析した結果、Osterixは、肥大軟骨細胞に強く発現していることが示された。このことは、骨芽細胞分化に必須であるOsterixが、内軟骨性骨形成においても重要な役割を果たしてりうことを示唆した。
2. Osterixノックアウトマウスの解析
内軟骨性骨化におけるOsterixの役割を明らかにするために、Osterlxノックアウトマウスを作製した。Floxマウスを作成後、CAG-Creトランスジェニックマウスと交配し、グローバルノックアウトマウスを作出した。Osterixノックアウトマウスでは、膜性骨化が強く阻害されていた。さらに内軟骨性骨化も野生型マウスに比べ、有意に抑制されていた。組織学的検索を行った結果、Osterixノックアウトマウスでは、軟骨細胞の肥大化までは、大きな障害は、認められなかったが、骨への置換が著明に抑制されていた。したがって、Osterixは、内軟骨性骨化過程の肥大化以降の時期において重要な役割を担っていると示唆された。
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