| 研究概要 |
今年度は研究の開始に当たり、材料の作製、研究法の整備などに重点をおいて研究を行い、以下の主要成果を得た。
1.組換え体、変異体による新規デンプンの作製
1)イネ形質転換体ライブラリー作製用の汎用コンストラクトの作製
ライブラリーを作製するため多種類の遺伝子制御に使用可能な汎用型の組換え用DNAコンストラクトを作製した。汎用コンストラクトとして、遺伝子発現を抑制するRNAi法用、および遺伝子をセンス方向に導入してイネ変異体に発現させる用を作製した。
2)主要デンプン合成関与遺伝子を制御したイネ形質転換体の作製
(1)RNAi法によって、3種類のBE遺伝子(BEI,BEIIa,BEIIb)について、単独および複数の遺伝子発現を同時に制御する形質転換体を作製した。
(2)lSA1とISA2の発現を抑制した形質転換体をRNAi法で作製した。また、ISA2遺伝子を高発現させた形質転換体を作製した。
2.イネ形質転換体、変異体の基本形質の解析およびデンプン物性の解析
(1)(BEI,BEIIa,ISA2,ISA3,Pho2,DE1,DE2)の抗体を作製した。
(2)多数の変異体のアミロペクチンの分子構造を調べるために蛍光-キャピラリ電気泳動法で鎖長分布を解析した。
(3)各変異体、組換え体デンプンのレオロジー特性を網羅的かつ効率的に測定するために、(1)粘性特性、(2)動的粘弾性特性、(3)曳糸特性、の分析法の整備・準備を行った。
3.イネデンプン変異体の選抜とデンプン変異体ライブラリーの構築
イネ変異体集団の中から、デンプン合成関連酵素の活性とタンパク質量をアクリルアミド電気泳動法で検出することによって標的変異体を選抜する方法を検討し、SS,DBE,Pho1,BEI活性が制御された変異体を選抜することに成功した。
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