研究課題
放射線や環境変異原によって生じたDNA損傷の多くはDNA複製を阻害する。DNA複製の停止は細胞にとって致死的であるが、この阻害されたDNA複製を再開する分子機構、複製後修復(PRR)が働くことにより細胞死は回避される。本研究の目的は、このPRRの生化学反応を試験管内で再構成し、その分子機構を解析することにある。損傷乗り越えDNA合成(TLS)経路の解析本研究では、1)RAD6-RAD18によるPCNAのモノユビキチン化反応と、2)複製型のDNAポリメラーゼ(Polδ)が、損傷乗り越え型のDNAポリメラーゼ(Polη)と交換する反応、を試験管内で再構成することに成功した(初年度)。昨年度は、Polι,PolκとREVIがこの反応系に影響を及ぼすことを明らかにした。本年度は、複製型のDNAポリメラーゼとREV1の交換反応を解析した。Template switch (TS)経路の解析TS経路では、停止したプライマー末端が新生娘鎖とアニーリングし、損傷のない鋳型を使ったDNA合成を行うことによりDNA合成を再開する。この反応は、SHPRHまたはHLTFタンパク質によるPCNAのポリユビキチン化により制御されると考えられる。本研究では、PCNAのポリユビキチン化に始まる一連の生化学的反応を再構成し、TS経路の生化学的実体の解析を目指している。昨年度は、PCNAをポリユビキチン化するユビキチンE3リガーゼのひとつ、HLTFの精製法を確立し、HLTFが実際にPCNAをポリユビキチン化する活性を持つことを証明した。本年度は、この反応機構を分子レベルで解析した。
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Cancer Research
巻: 70 ページ: 8407-8411
Hiroshima J Med.Sci.
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