新規な機能プロテインチップ技術の確立とその臨床応用

2010 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 20310121
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 応用ゲノム科学
• 研究機関: 横浜市立大学
• 研究代表者: 平野 久 横浜市立大学, 生命ナノシステム科学研究科, 教授 (00275075)
• 研究分担者: 川崎 博史 横浜市立大学, 生命ナノシステム科学研究科, 准教授 (70169704) ; 荒川 憲昭 横浜市立大学, 生命ナノシステム科学研究科, 助教 (60398394)
• 研究期間 (年度): 2008 – 2010
• キーワード: タンパク質 / 翻訳後修飾 / プロテインチップ / 質量分析装置

研究概要

ゲル電気泳動で分離した後、PVDF膜に転写したタンパク質を膜上で直接MALDI-MSで測定し、質量スペクトルからタンパク質を同定する技術が1990年代に発達した。しかし、膜上のタンパク質のイオン収量は低く、技術が実用的なものにならなかった。本研究で孔径0.1-μmのPVDF膜を用いると効率的にタンパク質をゲルから膜に転写し、質量分析装置によって膜上でタンパク質を同定できることがわかった。実際に物理化学的性質の異なる多数の蛋白質をこの方法で同定することに成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Proteomic identification of differentially expressed genes in neural stem cells andneurons differentiated from embryonic stem cells of cynomolgus monkey (Macaca fascicularis) in vitro. (2011)
  • 著者名/発表者名: Akama K, Horikoshi T, Nakayama T, Otsu M, Imaizumi N, Nakamura M, Toda T, Inuma I, Hirano H, Kondo K, Suzuki S, Inoue N.
  • 雑誌名: Biophys.Biochim.Acta 1814 ページ: 265-276
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nα-Acetylation of yeast ribosomal proteins : Identification by 2D-DIGE MS/MS and analysis of the effect on proteins synthesis. (2011)
  • 著者名/発表者名: Kamita M, Kimura Y, Ino Y, Kamp RM, Polavoda B, Sherman F, Hirano H.
  • 雑誌名: J Proteomics 74 ページ: 431-441
  • 査読あり
• [雑誌論文] Co- and post-translational modifications of the 26S proteasome. (2010)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi J, Iwafune Y, Akiyama T, Okayama A, Nakamura H, Arakawa N, Kimura Y, Hirano H.
  • 雑誌名: Proteomics 10 ページ: 2769-2779
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. (2010)
  • 著者名/発表者名: Kimura Y, Nagata K, Suzuki N, Yokoyama R, Yamanaka Y, Kitamura H, Hirano H, Ohara O.
  • 雑誌名: Proteomics 10 ページ: 3884-3895
  • 査読あり
• [雑誌論文] Proteomic analysis of membrane proteins expressed specifically in pluripoten stem cells (2009)
  • 著者名/発表者名: Itoh A, Kurisaki A, Yamanaka Y, Hirano H, Fukuda H, Sugino H, Asashima M.
  • 雑誌名: Proteomics 9 ページ: 126-137
  • 査読あり
• [雑誌論文] Wild-type p53 enhances Annexin IV gene expression in ovarian clear cell adenocarcinoma.
  • 著者名/発表者名: Masuishi Y, Arakawa N, Hirano H.
  • 雑誌名: FEBS J in press
  • 査読あり
• [学会発表] A novel PVDF membrane for on-membrane identification of gel-resolved proteins by MALDI MS (2010)
  • 著者名/発表者名: Ino Y, Okayama A, Arakawa N, Hirano H.
  • 学会等名: The 17th Meeting of Methods in Protein Structure Analysis
  • 発表場所: ウプサラ
  • 年月日: 20100825-20100828
• [学会発表] Proteome analysis for the discovery of biomarkers and therapeutic targets. (2010)
  • 著者名/発表者名: Hirano H, Arakawa N, Masuishi Y, Morita E., Miyagi E, Hirahara F.
  • 学会等名: 5th AOHUPO Congress, 14th ADNAT Convention & 1st PSI Conference
  • 発表場所: ハイデラバード
  • 年月日: 2010-02-24
• [学会発表] 診断マーカーのプロテオミクス,探索,バリデーション,利用の方法 (2009)
  • 著者名/発表者名: 平野久
  • 学会等名: 第60回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 松本
  • 年月日: 2009-09-20
• [学会発表] Proteomic analysis of co- and post-translational modifications in the yeast 26S proteasome. (2009)
  • 著者名/発表者名: 平野久
  • 学会等名: 11th International Congress on Amino Acids, Peptides and Proteins
  • 発表場所: ウイーン
  • 年月日: 2009-08-06
• [学会発表] バイオマーカーおよび創薬ターゲット探索のプロテオーム研究における質量分析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 平野久
  • 学会等名: 第61回日本細胞生物学会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2009-06-04
• [学会発表] 蛋白質複合体の翻訳後修飾のプロテオーム解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 平野久
  • 学会等名: 第73日本生化学会中部支部例会・シンポジウム
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2009-05-23
• [学会発表] 卵巣明細胞腺癌特異的なアネキシンIV遺伝子の発現に関わる転写製御因子の同定 (2008)
  • 著者名/発表者名: 増石有佑, 荒川憲昭, 川崎博史, 宮城悦子, 平原史樹, 平野久
  • 学会等名: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2008-12-10
• [学会発表] 卵巣明細胞腺癌におけるリン脂質結合タンパク質アネキシンIVの性状解析 (2008)
  • 著者名/発表者名: 田矢史織, 荒川憲昭, 川崎博史, 宮城悦子, 平原史樹, 平野久
  • 学会等名: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2008-12-10
• [学会発表] レドックスプロテオミスによる血管型NADPHオキシダーゼの標的タンパク質の探索 (2008)
  • 著者名/発表者名: 野村文子, 荒川憲昭, 山中結子, 勝山真人, 川崎博史, 平野久
  • 学会等名: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2008-12-10
• [学会発表] Proteomics for co- and post-translational modifications of the yeast 26S proteasome. (2008)
  • 著者名/発表者名: 平野久
  • 学会等名: Taiwan-Japan Proteomics Symposium
  • 発表場所: 台北
  • 年月日: 2008-12-04
• [学会発表] Proteomic analysis of serum from diabetic LEA/Sendai rats (2008)
  • 著者名/発表者名: Takahashi E, Okamura T, Ikari K, Hirano H, Yasuda K, Kaburagi K.
  • 学会等名: 17th Meeting of Methods in Protein Structure Analysis
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2008-08-27
• [学会発表] Protein identification and quantification using a proteome database of liquid chromatography-mass spectrometric data. (2008)
  • 著者名/発表者名: 川崎博史, 荒川憲昭, 平野久
  • 学会等名: 17th Meeting of Methods in Protein Structure Analysis.
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2008-08-27
• [学会発表] New potential therapeutic targets for ovarian clear cell carcinoma. (2008)
  • 著者名/発表者名: 荒川憲昭, 増石有佑, 山中結子, 川崎博史, 宮城悦子, 平原史樹, 平野久
  • 学会等名: 17th Meeting of Methods in Protein Structure Analysis
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2008-08-27
• [学会発表] N^α-Terminal acetylation of ribosomal proteins of Saccharomyces cerevisiae and its function. (2008)
  • 著者名/発表者名: Kamita M, Kamp RM, Hirano H
  • 学会等名: 17th Meeting of Methods in Protein Structure Analysis
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2008-08-27
• [学会発表] Identification and validation of ovarian cancer-associated proteins. (2008)
  • 著者名/発表者名: Hirano H, Arakawa N, Kawasaki H., Masuishi Y, Takahashi E, Yahagi S, Yamanaka Y, Miyagi E, Hirahara F.
  • 学会等名: 2nd Pacific Rim International Conference on Protein Science/4th Asian-Oceania Human Proteome Organization
  • 発表場所: ケアンズ
  • 年月日: 2008-06-25
• [学会発表] Proteomic analysis for identification of therapeutic targets of ovarian clear cell carcinoma. (2008)
  • 著者名/発表者名: 荒川憲昭, 増石有佑, 川崎博史, 宮城悦子, 平原史樹, 平野久
  • 学会等名: 2nd Pacific Rim International Conference on Protein Science/4th Asian-Oceania Human Proteome Organization
  • 発表場所: ケアンズ
  • 年月日: 2008-06-23
• [学会発表] Proteomic approach to discover biomarkers and therapeutic targets. (2008)
  • 著者名/発表者名: 平野久
  • 学会等名: 13th Joint Biophysics Conference
  • 発表場所: 台湾
  • 年月日: 2008-05-21
• [図書] タンパク質のアミノ酸配列と翻訳後修飾の分析,やさしい原理からはいるタンパク質化学実験法,タンパク質をみる-構造と挙動- 京都 (2009)
  • 著者名/発表者名: 平野久
  • 総ページ数: 1-32
  • 出版者: 化学同人
• [図書] N-Terminal sequencing of N-terminally modified proteins. In: The Protein Protocols Handbook, New York (2009)
  • 著者名/発表者名: Kamp K, Hirano H.
  • 総ページ数: 1063-1080
  • 出版者: Humana Press
• [図書] iTRAQ試薬を用いた疾患バイオマーカー探索,明日を拓く新次元プロテオミクス 東京 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木村弥生, 平野久
  • 総ページ数: 116-121
  • 出版者: 秀潤社
• [図書] タンパク質の事典 東京 (2008)
  • 著者名/発表者名: 平野久
  • 総ページ数: 621-627
  • 出版者: 朝倉書店
• [備考] ホームページ
  • URL: http://proteome.sci.yokohama-cu.ac.jp
• [産業財産権] 電気泳動で分離されたタンパク質を膜フィルターに転写し質量分析する方法 (2010)
  • 発明者名: 平野久, 井野洋子
  • 産業財産権番号: 2010-112156
  • 出願年月日: 2010-05-14