| 研究課題/領域番号 |
20310134
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
石野 良純 九州大学, 大学院・農学研究院, 教授 (30346837)
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| 研究分担者 |
跡見 晴幸 京都大学, 工学研究科, 教授 (90243047)
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| キーワード | DNA複製 / アーキア / 超好熱菌 / 分子メカニズム / 分子間相互作用 / 複製装置 / レプリソーム / 高次複合体 |
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| 研究概要 |
本年度は、Thermococcus kodakaraensisの3種のmcm遺伝子、および2種のpcna遺伝子をクローニングして、蛋白質を発現させ、蛋白質の機能解析を進めた。また分担者のほうで、これらの遺伝子破壊株の調製を試み、2種のmcm遺伝子と1種のpcna遺伝子の破壊株を作製した。それぞれ、一種ずつの遺伝子は破壊株が得られず、生存に必須の遺伝子であることが推定された。発現させた蛋白質は高純度に精製して、in vitroにおける活性を測定した。Mcmの一種は不溶化してしまい、調製が難しかったが、残りの2種はヘリカーゼ活性を確認した。また、PCNAは両者共にDNAポリメラーゼのDNA鎖合成活性を促進することを検出したが、活性には強さの違いやポリメラーゼに対する特異性があった。また、機能・構造解析が進んでいるPyrococcus furiosus由来のタンパク質については、複合体構造解析が進み、PCNA-DNA-DNAリガーゼ複合体やPCNA-DNA-DNAポリメラーゼ複合体、さらに、ウラシルグリコシラーゼ-DNA-APエンドヌクラーゼ-PCNAという塩基除去修復に関わる複合体についても、それらのモデル構造を提唱し、機能と構造の関係を議論した。
さらに、複製開始タンパク質であるOrc1/Cdc6について、複製起点(oriC)との相互作用様式、複製起点開裂反応、McmヘリケースのoriCへのリクルーティングなどを解析し、P. furiosusにおける複製開始課程の理解が深まった。これらの知見は、ヒトの複製開始反応の理解に繋がるものとして、今後の展開を考えている。
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