| 研究課題/領域番号 |
20350077
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
藤井 紀子 京都大学, 原子炉実験所, 教授 (90199290)
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| 研究分担者 |
森本 幸生 京都大学, 原子炉実験所, 教授 (80200450)
杉山 正明 京都大学, 原子炉実験所, 准教授 (10253395)
木野内 忠稔 京都大学, 原子炉実験所, 講師 (90301457)
齊藤 毅 京都大学, 原子炉実験所, 助教 (10274143)
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| キーワード | 蛋白質の異常凝集 / 白内障 / 老化 / ラセミ化 / 紫外線影響 |
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| 研究概要 |
本研究は、「蛋白質の異常凝集化はアミノ酸のD-体化が引き金である」という独創的な考えに基づいて、種々の蛋白質の異常凝集をD-Aspを分子指標として統一的に理解することを目的としている。平成20年度は下記の項目について研究を行った。
1) 水晶体の主要蛋白質であるαA-,αB-クリスタリンの異常凝集過程の解析
水晶体の主要蛋白質であるα-クリスタリン(Cry)はαA-,αB-という2種類のサブユニットから成るが、これらの生化学的性質は極めて良く似ている。しかし、リコンビナントのαA-,αB-Cryにそれぞれ、紫外線照射しながら、X線小角散乱実験、中性子散乱実験を行ったところ、αB-Cryのみが異常凝集化し、αA-Cryは変化がなかった。この結果は、αB-Cryのみが紫外線照射に対して感受性が強いことを示すものであり、α-Cryは2種類のサブユニットから構成されているために外界からの様々なストレスに対応可能であることが初めて明らかとなった。
2) 水晶体以外の眼組織におけるD-β-Asp含有蛋白質の検出
我々が開発したD-β-Asp含有蛋白質抗体をプローブとした免疫組織染色により水晶体以外の複数の眼の組織でもD-β-Asp含有蛋白質が存在していることを見出した。現在これらの蛋白質の同定を進めている。
3) 加齢や紫外線照射によって生じる皮膚のD-β-Asp蛋白質中の同定
我々は以前の研究で皮膚蛋白質中におけるD-β-Asp残基の増加は紫外線のストレスと関連が強いことを示した。20年度はマウスの皮膚に紫外線照射を行い、Asp残基のD-β-化が進んだ組織から蛋白質を抽出し、2次元電気泳動、D-β-Asp含有蛋白質抗体によるウエスタンブロッテイングを行い、その陽性スポットの蛋白質についてゲル内酵素処理、断片ペプチドの質量分析を行い、これらの蛋白質の同定に成功した。
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