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2010 年度 実績報告書

バンド3の三次元結晶構造解析と陰イオン透過分子機序の解明

研究課題

研究課題/領域番号 20370035
研究機関京都大学

研究代表者

小林 拓也  京都大学, 医学研究科, 講師 (20311730)

研究分担者 村田 武士  千葉大学, 理学研究科, 特任准教授 (80415322)
キーワード赤血球 / アニオントランスポーター / バンド3 / 結晶構造解析 / 抗体
研究概要

膜タンパク質を結晶化するには、界面活性剤のミセル中に膜タンパク質を取り込んだ状態で結晶化する必要がある。この状態では膜タンパク質の疎水的な表面は特定の構造をもたないミセルで覆われているため、結晶格子の形成に寄与できない。従って膜の外に飛び出した親水性部分が大きい膜タンパク質ほど結晶化しやすい傾向がある。そこで、村田、小林らは、赤血球から精製したバンド3をリポソームに再構築して免疫することで、抗バンド3モノクローナル抗体を作製することに成功した。得られた抗体は、精製バンド3と結合しWestern Blotに反応のしない(変性バンド3には結合しない)立体構造を認識できる抗体であることが分かった。現在、得られた6種類の抗体のFabフラグメントと精製バンド3を共結晶することで親水性部分を拡大し、結晶化効率の向上を試みた。これらの抗体を用いて結晶化条件の最適化とスクリーニングを行ったところ、1種類の抗体で分解能3.0-3.5Åの結晶を得ることができ、回折データを収集した。水銀を用いた重原子置換法により、位相を決定してモデリングを試みた。その結果、バンド3は阻害剤により外向き構造で固定化され、ダイマーを形成していた。抗体はバンド3の細胞外領域を認識していた。現在、論文を作成している。

  • 研究成果

    (5件)

すべて 2011 2010

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件) 学会発表 (1件) 図書 (1件)

  • [雑誌論文] Bulky high-mannose-type N-glycan blocks the taste-modifying activity of miraculin.2010

    • 著者名/発表者名
      Ito K., et al.
    • 雑誌名

      Biochim.Biophys.Acta.

      巻: 1800 ページ: 986-992

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Characterization of the beta-D-glucopyranoside binding site of the human bitter taste receptor hTASR16.2010

    • 著者名/発表者名
      Sakurai T., et al.
    • 雑誌名

      J.Biol.Chem.

      巻: 285 ページ: 28373-28378

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Crystallization and preliminary X-ray analysis of a glucansucrase form the dental caries pathogen Streptococcus mutants.2010

    • 著者名/発表者名
      Ito K., et al.
    • 雑誌名

      Acta.Crystallogr.Sect.F Struct.Biol.Cryst.Commun.

      巻: 66 ページ: 1086-1088

    • 査読あり
  • [学会発表] Yeast expression : a GFP-based platform for rapid construction and evaluation of highly expressed and stable GPCR variants in S.cerevisiae.2010

    • 著者名/発表者名
      Takuya Kobayashi
    • 学会等名
      GPCR Workshop
    • 発表場所
      Hawaii(USA)
    • 年月日
      2010-12-09
  • [図書] バイオインダストリー Gタンパク質共役受容体(GPCR)の三次元結晶構造解析への試み2011

    • 著者名/発表者名
      小林拓也
    • 総ページ数
      23-29
    • 出版者
      シーエムシー出版

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公開日: 2012-07-19  

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