| 研究概要 |
真核細胞生物のゲノムDNAはヒストン蛋白質(H2A, H2B, H3, H4)との複合体であるヌクレオソーム構造が繰り返し単位となって構築されている。このため、発生・分化の過程や環境の変化に応じて必要な時期に必要な遺伝子を発現させるためには、ゲノム上の特定箇所のヌクレオソーム構造をいったんほどき、再び集合させるといった分子機構が必要である。FACT蛋白質は、ヒストンH2A/H2Bの集合と解離に関係していると考えられているヒストンシャペロンで、転写に関与する事が種々の生物学的、生化学的実験から示唆されてきている。本研究ではFACTの機能解析を進める為に、FACT蛋白質を含む複合体の構造解析を目指している。昨年度得られた精製サンプルを検討した結果、ヒストン等の宿主細胞由来の因子が含まれていたことが分かった。これらの宿主因子は、結晶化などの物理化学実験に悪影響を及ぼすと考えられたため、今年度はこれらの因子を取り除くことを行った。しかし、この操作により得られるFACTの量が激減してしまったため、さらなる精製方法の最適化を行なった。その結果、5Lの培養昆虫細胞から、10mg程度の超高度に精製されたFACTタンパク質を得ることに成功した。この蛋白質を用いて、物理化学測定および結晶化のスクリーニングを開始したが結晶は得られていない。現時点で最も大きな問題となっているのが、FACTタンパク質とピストンを混合すると溶液内に沈殿が生じてしまう点である。これは、複合体形成に伴う何らかの変化が関係していると考えられるため、現在沈殿を生じさせないような溶液条件を探索中である。今後は、結晶化を成功させるため、分子中の酸性領域等の除去や他のタンパク質との複合体形成などを検討している。
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