| 研究概要 |
複製クランプPCNAの第2のローダーで、染色体接着に必要とされるCtf18-RFC複合体が、DNAポリメラーゼと相互作用する分子機構の詳細を解明し、多様な反応に関与するDNAポリメラーゼが協調的に使い分けられる機構を明らかにすることを目的として研究を行い、以下の結果を得た。
1. polεとCtf18-RFC間の安定な結合に必要なpolεp260の領域を解析し、N末端側メインが関与することを示した。また、Ctf18-RFCのサブ複合体、18-1-8が結合に必要であることを明らかにした。さらに両者の結合でpolεのDNA合成活性が抑制されることを見出した。これはローダーが複製ポリメラーゼの活性制御することを示した新しい知見である。
2. Ctf18サブユニットのpolεとの安定な結合に必要な機能領域を限定しC末側23アミノ酸で十分であることを明らかにした。同時にこの領域が染色体接着因子Dcc1,Ctf8との複合体形成に必要な領域であることも示した。これらの構造の理解は、この3者の複合体形成で、次のパートナー結合構造が形成されるという新たな機能モチーフの解明に結びつくことが期待できる。
3. MCMとローダーの相互作用を解析し、MCMの構成の違いで結合するローダーの特異性が変化することを明らかにした。これはMCMの複合体状態変化により複製フォークの分子集合が制御されることを示唆する。
4. 複製ローダーであるRFCとMCMのDNA結合様式を解析し、これらが協同的にDNAと結合することを明らかにした。この結果は、複製フォークの集合に両者の相互作用が協同して安定な複製フォーク複合体形成を行う機構の存在を示唆している。
|
