研究課題
研究計画に従って、(1)増殖可能上限温度を3度上昇させた大腸菌をさらに高温適応させて、最少培地で46度でも通常の比増殖速度が得られる株を進化させた。(2)再現性が高く,検出感度・精度も高レベルで安定しているゲノム変異解析,トランスクリプトーム比較解析を可能にするために、ゲノムタイリングアレイ使用条件の最適化を行った。その結果、一塩基置換が検出可能で、高精度のトランスクリプトーム解析が可能な条件を見出した。(3)41度、43度、45度と徐々に高温適応した大腸菌株について、その進化過程の途中のストック株についてゲノム変異解析を行った。その結果、同義置換率を考慮して、43度以上で顕著な自然突然変異率の上昇がみられた。また、変異は酵素類よりはファクターなどの制御因子に多く入っていた。今後は配列確認と統計解析を進める。(4)41度、43度、45度と徐々に高温適応した大腸菌株について、その進化過程の途中の株の可溶性細胞抽出液のタンパク質組成を電気泳動にて分析し、45度で発現の上昇や消失が見られるタンパク質および60度2時間処理に耐性を有するタンパク質を数種類見いだし、質量分析によるタンパク質同定を行った。その結果、分子シャペロンや細胞内酸化ストレスに関与するタンパク質、解糖系酵素を同定した。
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