多包条虫の網羅的cDNA解析と寄生虫の増殖・分化の分子基盤とワクチン開発

2009 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20380164
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 奥 祐三郎 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 准教授 (60133716)
• 研究分担者: 松本 淳 日本大学, 生物資源科学部, 講師 (70296169) ; 渡辺 純一 東京大学, 医科学研究所, 助教 (20201189) ; 八木 欣平 北海道立衛生研究所, 生物科学部, 衛生動物科長 (70414323)
• キーワード: エキノコックス / 網羅的cDNAライブラリー / RNA干渉 / 発育段階 / テトースパニン / 組み換えワクチン / 糖蛋白 / in silico解析

研究概要

我々は多包条虫の幼虫と成虫のcDNAライブラリを作成し、5'ワンパスシークエンスデータからin silico解析を行っている。5種のSpliced leader,様々な主要抗原の幼虫および成虫の発現の偏り、熱ショック蛋白(18種)、ミトコンドリアlarge subunit ribosomal RNA(16S)、成虫特異的に発現するSolute Carrier Familyおよび成虫の様々な蛋白など、その他の遺伝子も含めて多包条虫の発育段階により顕著な差が有ることが示された。
次ぎに、これらの分子の機能を解析するため、前年度に原頭節のRNA干渉の条件設定を行ったAntigenBにつづいて、ターゲットとして幼虫の増殖に関連すると考えられるAntigenII/3,14-3-3に注目し、RNA干渉を試みた。リアルタイムRT-PCRによりmRNAを測定し、AntigenII/3,14-3-3のmRNAは顕著に減少していることを示し、さらに、抗血清用いてこれらのタンパク量においても減少していることを確認した。また、これらのについて多包虫の胚芽細胞を用いたRNAiも行い、成功した。
ワクチン候補としてTetraspanin類(TSP1-12)について解析し、TPS1-7について幼虫に対するワクチン効果を比較し、TSP1と3に効果があり、TSP5は有鉤嚢虫診断用抗原との相同性から今後診断用抗原としての有効性が示唆された。さらに、さまざまなプロテアーゼ(18種)、抗酸化関連遺伝子、アクチン(6種)などについて解析した。現在は成虫および幼虫に特異的な主要診断用抗原である糖蛋白(特にTSES33/38とEm2)に注目し、研究を進めている。

研究成果

• [雑誌論文] Echinococcus multilo cularis : two-dimensional Western blotting method for the identification and expression analysis of immunogenic proteins in infected dogs. (2010)
  • 著者名/発表者名: Kouguchi H, Matsumoto J, Katoh Y, Suzuki T, Oku Y, Yagi K.
  • 雑誌名: Exp Parasitol. 124 ページ: 238-243
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluation of Echinococcus multilocularis tetraspanins as vaccine candidates against primary alveolar echinococcosis. (2009)
  • 著者名/発表者名: Dang Z, Yagi K, Oku Y, Kouguchi H, Kajino K, Watanabe J, Matsumoto J, Nakao R, Wakaguri H, Toyoda A, Sugimoto C.
  • 雑誌名: Vaccine. 27 ページ: 7339-7345
  • 査読あり
• [雑誌論文] Multiplex PCR system for identifying the carnivore origins of faeces for an epidemiological study on Echinococcus multilocularis in Hokkaido, (2009)
  • 著者名/発表者名: Nonaka N, Sano T, Inoue T, Teresa Armua M, Fukui D, Katakura K, Oku Y.
  • 雑誌名: Parasitol Res. 106 ページ: 75-83
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular cloning and characterization of a T24-like protein in Echinococcus multilocularis. (2009)
  • 著者名/発表者名: Dang Z, Watanabe J, Kajino K, Oku Y, Matsumoto J, Yagi K, Kouguchi H, Sugimoto C.
  • 雑誌名: Mol Biochem Parasitol 168 ページ: 117-119
  • 査読あり
• [学会発表] In silico analyses of full -length rich cDNA libraries of larval and adult Echinococcus multil ocularis(Preliminary results). (2009)
  • 著者名/発表者名: Oku, Y., Armua -Fernandez M. T., Yagi, et al
  • 学会等名: Workshop on"Recent advances in the biology and biochemistry of Echinococcus infections", in the context of the XXIII World Congresss of Hydatidosis.,
  • 発表場所: Hotel Raisson, Coloniadel Sacrament o, Uruguay
  • 年月日: 2009-12-10
• [学会発表] RNA interference(RNAi)methods for protoscoleces and primary cells of Echinococcus multilocularis (2009)
  • 著者名/発表者名: Mizukami, C., Spiliotis M., Gottstein, B., Katakur a, K., Oku, Y.
  • 学会等名: The XXIII World Congresss of Hy datidosis.
  • 発表場所: Hotel Raisson, Coloniadel Sacramento, Uruguay
  • 年月日: 2009-12-10
• [学会発表] DNA dot blot assay for the differentiation of Taeniid cestodes in canids. (2009)
  • 著者名/発表者名: Armua-Fernandez, M.T., Nonaka, N., Sakurai, T., Go sttstein, B., Deplazes, P., Katakura, K., Oku, Y,
  • 学会等名: The XXIII World Congresss of Hydatidosis.
  • 発表場所: Hotel Raisson, Coloniadel Sacramento, Uruguay
  • 年月日: 2009-12-10
• [学会発表] 幼虫および成虫の多包条虫cDNAライブラリーに多く見られたcDNAのin silico解析、特にAntigenBとLSU rRNAについて (2009)
  • 著者名/発表者名: 奥祐三郎、八木欣平、原雄一郎、渡辺日出海、李爽、山下理宇、若栗浩幸、鈴木穣、豊田敦、渡辺純一
  • 学会等名: 第55回日本寄生虫学会・日本衛生動物学会
  • 発表場所: 帯広市 帯広畜産大学
  • 年月日: 2009-10-03
• [学会発表] Discrimination of taeniid cestodes in canids by using species-specific oligonucleotide probes (2009)
  • 著者名/発表者名: Armua-Fernandez, M.T., Nonaka, N., Sakurai, T., Katakura, K., Oku, Y.,
  • 学会等名: 第55回日本寄生虫学会・日本衛生動物学会
  • 発表場所: 帯広市 帯広畜産大学
  • 年月日: 2009-10-03
• [学会発表] 多包条虫(幼虫・成虫)のcDNAライブラリーのin silico解析特にSpliced Leaderを有する遺伝子について (2009)
  • 著者名/発表者名: 奥祐三郎、八木欣平、原雄一郎、渡辺日出海、李爽、山下理宇、若栗浩幸、鈴木穣、豊田敦、渡辺純一
  • 学会等名: 第148回日本獣医学会学出集会
  • 発表場所: 鳥取市 鳥取市民会館
  • 年月日: 2009-09-26
• [学会発表] 人と動物の共通感染症:エキノコックス症の問題解決に向けて(特別講演)招待講演 (2009)
  • 著者名/発表者名: 奥祐三郎
  • 学会等名: 第32回 日本骨・関節感染症学会
  • 発表場所: 札幌市京王プラザホテル
  • 年月日: 2009-06-19
• [備考] フル エキノコックス
  • URL: http://fullmal.hgc.jp/em/