| 研究課題/領域番号 |
20380184
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
松田 幹 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 教授 (20144131)
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| 研究分担者 |
灘野 大太 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 准教授 (00228074)
岡島 徹也 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (20420383)
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| キーワード | ウイルス / 感染症 / 糖鎖 / 食品 / 環境 |
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| 研究概要 |
1. ヒト腸上皮様細胞株のノロワイルスVLPs受容体の探索
(1) VLPs受容体候補分子を高発現させるための細胞分化条件の検討:ヒト腸上皮様細胞株を、異なる培養条件(培養基質と多孔性膜などの基材)で培養し、培養上清に添加したVLPsの細胞表面への結合量の変動を、抗-VP1抗体を用いた細胞表面の光免疫組織化学と、細胞溶解液のSDS-PAGE/免疫ブロット法により解析した。その結果、腸上皮細胞の分化と対応してVLPsの結合性が上昇することを明らかにし、現時点で可能な範囲でのVLPsの結合に最適な条件を設定した。
(2) 腸上皮様細胞株の受容体候補分子の探索:腸上皮様細胞株を表面ビオチン化処理し、標識された形質膜タンパク質をSDS電気泳動により分画した。さらに分離したタンパク質を膜に転写し、酵素標識アビジンでビオチン化タンパク質を検出した。その結果、一部の特定のタンパク質がビオチン化されていることを確認した。
2. 二枚貝中腸腺上皮組織のノロウイルスVLP受容体の探索
(1) 吸水管から取り込まれたタンパク質の二枚貝中腸腺への移行:二枚貝(アサリ)をカゼインあるいは卵アルブミンを含む塩溶液に浸してタンパク質を取り込ませた後、貝の中腸腺から導管部と盲嚢細管部を摘出し、凍結切片を作成して固定した。洗浄後、取り込ませたタンパク質に特異的な抗体および蛍光標識二次抗体を用いて染色し、蛍光顕微鏡下で盲嚢細管上皮組織への外来タンパク質の移行、残留を確認した。
(2) 中腸腺組織、粘膜上に発現する糖タンパク質糖鎖の解析:糖鎖認識特異性のことなるレクチンを用いて、中腸腺での糖鎖の発現様式を解析した。その結果、組織血液型抗原と類似の構造をもつO-型糖鎖の発現は低く、N-型糖鎖の末端シアル酸を欠く糖鎖構造が優勢であると推定された。
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