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(1)ガメトサイト分化誘導過程で2-Cys型Prxが果たす役割の解析
2-Cys型Prx(TPx-1)遺伝子欠損ローデントマラリア原虫接種ローデントから原虫細胞をサンプリングして、赤内型原虫のタンパク質発現プロファイルを親株のそれと比較した。リン酸化タンパク質特異的蛍光プローブを用いた二次元電気泳動法を利用して、網羅的な比較解析をおこなったところ、両者でリン酸化タンパク質のスポットパターンが異なることが見出された。現在、差異が認められるスポットの再現性の検証、およびLC-MS/MSによる質量解析を計画している。
(2)オーシスト発育過程で2-Cs型Prxが果たす役割の角析
TPx-1にはオーシスト核DNAの保護作用が考察されるが、その核への移行には他の分子との相互作用が必要と考えられる。今年度は、GFPタグ付きのTPx-1トランスジェニックローデントマラリア原虫について、同分子の細胞内局在を、ステージ毎に共焦点レーザー顕微鏡で観察した。赤内型トランスジェニック原虫ではGFPシグナルが原虫細胞質に観察され、以前に報告されたこの分子の細胞内局在が検証された。蚊中腸オーシストでは、GFPシグナルは主に原虫細胞質に観察され、核へのTPx-1の移行を観察することができなかった。GFPタグによる影響を考察して、現在、特異抗体を用いた昆虫ステージ全般でのTPx-1発現プロファイル観察実験を計画している。
(3)スポロゾイトの哺乳類感染過程で2-Cys型Prxがたす役割の解析
ローデントマラリア原虫スポロゾイト接種実験をin vitro培養細胞(HepG2細胞)を用いておこなった。細胞内に侵入・寄生した原虫を特異抗体(抗Circumsporozoite[CS]抗体あるいは、抗Prx抗体)を用いた間接蛍光抗体法で観察した。その結果、同原虫肝内型ステージでのTPx-1、および1-Cys Prxの発現が確認された。現在TPx-1 KO原虫の肝内型増殖について観察する実験を計画している。
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