| 研究課題/領域番号 |
20390205
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
青柳 豊 新潟大学, 医歯学系, 教授 (00142266)
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| 研究分担者 |
内海 利男 新潟大学, 自然科学系, 教授 (50143764)
大越 章吾 新潟大学, 医歯学系, 講師 (70231199)
須田 剛士 新潟大学, 医歯学系, 講師 (10361916)
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| キーワード | フコース転移酵素 / 肝細胞癌 / フコシル化AFP / FUT8 / 糖鎖 |
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| 研究概要 |
α1-6フコース転移酵素(FUT8)は、肝癌の生物学的悪性度の指標とされるフコシル化AFP産生に関与しているが、その機序の分子機構は解明されていない。肝癌細胞を用いてRNAiの手法によりFUT8遺伝子発現を抑制し基礎的検討を行なった。
【結果】肝癌細胞株にTransientにFUT8 siRNAを48時間導入しFUT8 mRNA発現量をリアルタイムPCRで確認したところ、Control SiRNA導入細胞株に比較し、KYN2細胞株で最大5.9±0.9%にFUT8 mRNA発現が抑制された。しかし、FUT8蛋白機能評価として、LeeChip^<TM>Ver1.0を用いた細胞質の糖鎖プロファイリング解析を行った結果、細胞内フコシル化蛋白の低下は確認できなかった。SiRNAによる明瞭なFUT8遺伝子発現抑制を認めたが、それに伴う蛋白レベルの発現低下や実際のFUT8酵素活性低下による遺伝子発現・関連蛋白質の解析には更なる遺伝子発現の抑制が必要であると考え、FUT8のCre-loxP系を用いたコンディショナルノックアウトマウス(FUT8^<loxP/loxP>-AlbCre^<+/->マウス)を作製した。現在、同マウスの肝臓におけるFUT8蛋白機能を確認中である。
【考察】RNAiの手法で、明瞭なFUT8遺伝子発現抑制を認めたが、細胞内フコシル化蛋白の低下は確認できなかった。今後、FUT8コンディショナルノックアウトマウスを用いたin vivoでの発癌実験に加え、肝癌組織と非癌部肝組織における網羅的遺伝子解析とレクチンマイクロアレイによる糖鎖プロファイリングを行い、肝発癌における腫瘍進展・浸潤に関わる分子機構の解析を行う予定である。
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