| 研究課題/領域番号 |
20390214
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
本間 定 東京慈恵会医科大学, 医学部, 准教授 (50192323)
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| 研究分担者 |
小井戸 薫雄 東京慈恵会医科大学, 医学部, 准教授 (70266617)
伊藤 正紀 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (80297366)
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| キーワード | 膵癌 / ペプチドワクチン / プロテオーム / 癌幹細胞 / 樹状細胞 |
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| 研究概要 |
ヒト膵癌細胞Panc-1細胞を蛍光色素Hoechist-33342で染色し、FACS sorting法を用いて未染細胞分画をSP細胞分画(癌幹細胞分画)、可染細胞分画をnon-SP細胞分画(非癌幹細胞分画)として採取した。凍結融解操作によりSP細胞、non-SP細胞分画のlysateを得て使用まで凍結保存した。Panc-1細胞と同じHLA-A^*0201のMHC-class Iを発現する健康ボランテイアの末梢血細胞をrh-GM-CSF, rh-Il-4を用いて培養しDCを得た。上記で得られたSP細胞、non-SP細胞のlysateを一晩DCにパルスして取り込ませた後、OK-432を用いてDCを成熟させた。得られた2群のDCと、lysateを取り込ませていないcontrol DCの計3群を可溶化し、抗HLA-A0201抗体のaffinity column chromatographyによりMHC class I/peptide複合体の抽出を行った。Panc-1細胞の発現するHLA-A^*0201に対する単クローン抗体は商品化されておらず、この実験に先立ち同抗体を産生するハイブリドーマをヌードマウス移植により腹水化し、腹水よりIgGを精製してaffinity columnの作製を行った。このcolumnを使用してMHC class I-抗原ペプチド複合体の精製を進めたところ、SP細胞lysateを取り込ませたDCに特異的に認められる複数のペプチドイオンピークを同定した。
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