| 研究課題/領域番号 |
20390299
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
高橋 孝雄 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (80171495)
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| 研究分担者 |
小崎 健次郎 慶應義塾大学, 医学部, 准教授 (30234743)
三橋 隆行 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (80338110)
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| キーワード | 神経発生 / 細胞周期 / 大脳皮質 / エピジェネティクス |
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| 研究概要 |
本研究ではエピジェネティクス機構、特にクロマチン構造を制御するピストン脱アセチル化酵素が、大脳皮質を構築する神経前駆細胞の細胞周期調節機構に果たす役割を解明する。具体的にはピストン脱アセチル化酵素を神経前駆細胞特異的に、かつ発生時期特異的に強制発現させることのできるマウスを作成、ピストン脱アセチル化酵素Sir2強制発現により神経前駆細胞に惹起される細胞分裂動態の変動、結果として大脳皮質の組織学的構築に生じる異常を解析する。
本年度はこれまでに作成に成功したTRE-Sir2トランスジェニックマウスを用いて以下の実験を行った。TRE-Sir2トランスジェニックマウスと、nestin陽性神経前駆細胞特異的にテトラサイクリン強制発現システムの調節タンパク質rtTAを発現するトランスジェニックマウス(nestin-rtTA)とを交配し、両遺伝子を持つダブルトランスジェニック胎仔を持つ母親マウスにドキシサイクリンと対照としてのPBSを胎生14日午前9時より12時間おきに経口投与した。
胎生16日目のマウス胎児に、S期特異的トレーサーであるIdUを午前7時に一回母親経由で曝露し、その後BrdUを午前9時より2、5、8、12、17時間、3時間おきに連続曝露した。当初の計画では、出生21日目の仔マウス大脳を4%パラフォルムアルデヒド固定し、IdUおよびBrdUに対する二重免疫組織染色を行うことによって、IdUと初回BrdU投与の間の2時間に分化を開始した細胞群(2時間コホート)をIdUのみで標識された細胞として大脳皮質内に同定することを予定していた。しかし、母親にIdUとBrdUを反復して腹腔内投与した結果、出生した仔マウスを養育せず、出生21日目の胎児を得ることができなかった。原因として、妊娠時に腹注を頻回に実施することによりストレスが増強された結果と考えられ、今後の実験手法に課題を残した。
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