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本年度は各種欠損細胞を用いたDNA損傷認識および修復機構関連遺伝子と温熱感受性および温熱耐性獲得の関連性についての解明を試みた。
【方法】DNA二本鎖切断の損傷認識にかかわるH2AX、MDC1、ATM、53BP1、NBS1、MRE11、RAD50、BRCA1、非相同組換え修復にかかわるDNA-PKcs、Ku70、Ku80、XRCC4、LIG4、REV3L、相同組換え修復にかかわるXRCC2、BLM、WRN、DNA架橋除去にかかわるFANCA、FANCC、FANCD、乗換え修復にかかわるREV1除去修復にかかわるPOLβ、POLη、POLτ、POLκ、LIG1、PARPについて、それぞれのノックアウトマウスから確立されたMEF細胞をあらかじめ温熱45.5℃処理5分後、6時間後、再び温熱45.5℃処理後の生存率をコロニー形成法で調べた。対照としてそれぞれの親株マウスから確立されたMEF細胞を用いた。1ヒット多標的モデルより平均致死湿熱処理時間(TO)を算出した。
【結果】今回調べた中でPOLβ欠損細胞のみが部分的に温熱耐性を抑制することを明らかにした。
【総括】温熱によるDSB生成にPolβが部分的に関与しており、温熱耐性の獲得はあらかじめの温熱で誘導されたHspが分子シャベロン機能によって失活したPolβの活性をとり戻させることでDSB生成量を少なくし、細胞死を免れていると推測している。今後、さらなるがん細胞の温熱耐性獲得機構の解明により、その耐性を抑制することで、がん治療効果の増進を自指したい。
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