| 研究課題/領域番号 |
20390463
|
|---|
| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
|---|
研究代表者 |
中浜 健一 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 准教授 (60281515)
|
|---|
| 研究分担者 |
森田 育男 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (60100129)
市野瀬 志津子 東京医科歯科大学, 先端研究支援センター, 助教 (60014156)
|
|---|
| キーワード | 骨芽細胞 / 骨細胞 / ギャップジンクション / cAMP |
|---|
| 研究概要 |
1、骨芽細胞内cAMPレベルの可視化(発光および蛍光による)
CREプロモーター下流にELucまたはAcGFPを発現するレトロウイルスベクターpCRE-ELucおよびpCRE-AcGFPを構築し、cAMPの動きが観察できた。しかしながら、細胞内のcAMPの動態をリアルタイムで観察する必要性から、ルシフェラーゼの改変タンパクcAMP GloSensor発現レトロウイルスベクターを構築し、細胞に発現させることで、リアルタイムでのcAMPの増加を確認できた。また、骨芽細胞と骨細胞にこのタンパクを発現させ、顕微鏡下で発光を観察した結果、ギャップジャンクションを介すると考えられるcAMPの移動がリアルタイムで確認できた。さらに、骨細胞の主なギャップジャンクションタンパクであるコネキシン43をノックダウンした細胞を作製した。骨芽細胞と骨細胞の共培養でcAMPの濃度の指標であるルシフェラーゼ活性は低下し、骨細胞による骨芽細胞内cAMP濃度は骨細胞のギャップジャンクションに依存していると考えられた。また、共培養系で、骨芽細胞の破骨細胞支持能を調べた結果、骨細胞による骨芽細胞の破骨細胞支持能の低下が観察された。
2、遺伝子改変動物を用いた解析
現在、コネキシン43の骨芽細胞特異的ノックアウトおよびタモキシフェン投与によりコネキシン43のノックアウトを誘導できるマウスの作製が終了し、現在、表現系の詳細な検討を行っている。
|
