| 研究概要 |
白血球の内皮細胞への接着、内皮下への浸潤は、炎症を起こした血管部位で生ずる生体防御機構の1つであり、様々疾患に関与している現象である。本研究では、遊走・浸潤過程にある単球のアクチンフィラメントに着目し、実時間でアクチン挙動を観察するシステムを構築し、単球の内皮下浸潤メカニズムの解明を目指す。
本年度は、生細胞中のアクチン観察法の確立を目指し、アミノ酸13個からなる新規のアクチン結合ペプチドであるLifeact(Nature Methods,2008)とQdot605との結合を行い、Lifeactを用いたアクチン染色法の有効性を確認した。LifeactとQdotを用いて単球系株化細胞THP-1のアクチン染色を行ったところ、従来法であるAlexa488 phalloidinを用いた染色結果と同様な結果であった。また、生細胞中での観察を目指す事から、Snap-tag(New England Biolab社:分子量20kD)と融合したプラスミドベクター作製した。ヒト末梢血より単離した単球に対してはプラスミドベクターの導入、タンパク、ペプチドの発現は困難なことから、株化細胞による遺伝子導入、アクチンの可視化を目指した。細胞としてはHL-60、U937ならびにTHP-1を用いてガラスマイクロピペットによる遊走制御を調べたところ、培養ディッシュ上でTHP-1が最も効率よく遊走を制御出来たことから、実験にはTHP-1を用いることとした。THP-1にLifeact+Snap-tagのプラスミドベクターを導入し、遊走状態でのアクチン観察にも成功した。現在さらに内皮細胞上で遊走状態にあるTHP-1のアクチン観察を実施している。
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