| 研究概要 |
本研究では酵素RNA分子であるハンマーヘッド型リボザイム(HHRz)を用いた遺伝子治療法開発を目指す.HHRzによる遺伝子治療ではmRNAにUC、UA、UUのいずれかの配列が無ければ異常mRNAを切断できないが,これがリボザイムの遺伝子治療応用への障害となっている。そこで本研究では三次元構造に基づきリボザイムを改変し、上記以外の配列も切断可能なリボザイムの創製を目指す(切断必須配列の改変・拡張).上記の目的を達成するため昨年度は以下の実験を行った.
1)HHRzの基質となるにはUX(X≠G)配列が必要であるが、X=Gでも切断可能なHHRzを作製し、その切断活性を検証する。コア配列に改変(G-C->C-G conversion)を加えたHHRzを作成し、X=Gでも不活性構造を形成しないと期待されるリボザイムを調製した.2)U__-X配列のU(U16.1)がC(C16.1)に置換されても切断可能なリボザイムを設計した.このリボザイムではA15.1残基をイノシン(I15.1)に置換したものを作製した.
そこで今年度は、上記の変異型リボザイムの活性評価を行った.その結果,1)のリボザイムでは弱い活性が見られた.また,2)のリボザイムは期待通りUX配列がC__-Cとなった場合にも切断活性を示すリボザイムを調製することができた.さらに本変異型リボザイムがどのような配列を切断可能であるかについて世界的に調べられていないため,基質の切断部位の配列であるUX配列をNN(N=全てのヌクレオチド)として可能な16通りの配列を有した基質鎖を調製した.
今後は上記変異型リボザイムについて,どのような配列を切断可能であるかを網羅的に調べて,より基質適用性の高いリボザイム創製につなげたいと考えている.
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