研究課題
これまでに申請者らは、ヒト複製フォーク複合体構成因子であるTimless(Tim)、Tipin、AND-1が、正常なDNA複製を行うのに必要であること、複製チェックポイントの活性化に必要であること、またS/G2期に特有のエラーフリーな相同組換え修復に必要であることを明らかにした(吉沢ら、2007;2009)。また、フォーク因子群は共通する機能を持つ一方で、DNAの損傷や複製停止からの回復といったカスケードの選択において異なる機能を持つことを示す予備的な知見を得ている。本年度は、AND-1とTimによるゲノム安定性維持機構の分子機構の解明に重点を置き以下の成果を得た。1.核画分の分画とフォーク複合体の単離(1)核可溶性画分(NS)とクロマチン画分(Chr)を分ける独自の分画法を確立した。(2)TAPタグを付加したTim安定発現細胞株を(1)に従い分画して免疫沈降を行った。その結果、S期ではNS画分でTipinが、Chr画分ではTipinとClaspinがTimと結合していた。2.姉妹染色体交換(SCE)におけるフォーク因子の機能 昨年度、AND-1の発現を抑制したHeLa細胞では正常な複製時に自然発生するSCEの頻度が低下することを報告した。本年度、SCEを促進する複製阻害剤マイトマイシンC(MMC)存在下でAND-1を発現低下したところ、SCE亢進への影響はなかった。一方、Timの発現低下はどちらもSCEを強く促進することから、TimはSCEでは常に負に働くことがわかった。以上の成果から、複製フォーク複合体はその局在やDNA損傷の有無に応じて機能を変え、個々の構成因子は相補、相反あるいは独立に作用することがわかった。これらの知見を元に、今後、フォーク複合体の複雑な機能変化を制御するメカニズムを明らかにしていく。
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Annu.Rev.Biochem.
巻: 79 ページ: 89-130
http://www.rinshoken.or.jp/CB/index-jp.htm
http://rinshoken.igakuken.or.jp/
