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本研究ではDREFをノックダウンしたときに生じる核内の構造とクロマチンの変化を詳細に解析し、hDREFのクロマチンの活性と構造の制御において果たす役割を明らかにすることをめざしている。本年度は、hDREFをノックダウンすると核内で何が起こるのかを明らかにするために、hDREFノックダウン細胞を電子顕微鏡で観察した。その結果、hDREFのノックダウンにより、核膜直下や核小体周辺でのヘテロクロマチンと考えられる電子密度の高い領域が増加していることが判明した。そこで、hDREFのノックダウンによりヘテロクロマチンの量が増加しているかどうかを、クロマチンの動態変化をモニターすることができるヒストンH3の特定のアミノ酸残基特異的な化学修飾を認識する抗体を用いた細胞の免疫染色やイムノブロッティング解析により調べた。さらにin vivoヌクレアーゼ感受性アッセイを行い、核内のヌクレオソームの状態を調べた。これらの実験から、hDREFのノックダウンはヘテロクロマチン化を亢進させることを意味する結果が得られた。一般的な転写因子の核内局在とは異なり、hDREFは核膜直下のヘテロクロマチン領域や、核マトリクス上にも存在することも判明した。
得られた結果を総合して、hDREFは核膜直下におけるクロマチンの動態制御に関与していることが強く示唆された。次年度は、hDREFが結合している領域をクローニングするとともに、核膜周辺でのhDREFの動態について詳しく調べる予定である。
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