| 研究概要 |
細胞周期におけるヘテロクロマチンの量的変化や核内局在の動態を調べるために、ヒト培養細胞(HeLa cell)を同調培養し、構成的ヘテロクロマチンに特異的なピストンの化学修飾を認識する抗体で細胞の免疫染色を行い、構成的なヘテロクロマチンは細胞周期を通じて維持されていることを明らかにした。一方、細胞内のhDREFをノックダウンしたときには、DNase抵抗性のヌクレオソーム(ヘテロクロマチン)の量が増加する。そこで、これらがクロマチンの特定の領域に由来するのかどうかを調べた。ヘテロクロマチンに結合する因子に対する抗体(HII1α、β,γなど)あるいはセントロメやテロメアなどの構成的クロマチンに結合する因子(CENP・B, E, TRF2など)に対する抗体を用いて、hDREFノックダウン細胞を免疫染色したところ、いずれの抗体を用いても核膜周辺と核小体周辺で強いシグナルが得られた。なかでも、テロメア結合因子TRF2の核小体周囲への集積は顕著であり、hDREFがテロメアの核内動態に関与している可能性が示唆された。
hDREFのノックダウンにより核膜および核小体周囲で増加するヘテロクロマチンを観察するためのFISH法の確立を行った。テロメアを間期細胞核で検出できるようになったので、次年度にはテロメアのほかにセントロメア、またhDREFが結合するクロマチン領域の核内局在を調べるつもりである。さらに、hDREFと相互作用してクロマチン境界領域の制御を行う因子の同定をめざして、Flagタグ付きhDREFを安定に発現する細胞からhDREF結合因子を精製する試みに着手した。
|
