| 研究概要 |
トランスポゾンを利用し、プラナリアへの遺伝子導入を試みるために、まず、使用を計画している3種のトランスポゾン、Hermes,piggyBac,Minosの各々について、それらのトランスポゼースが機能するか否かをアフリカツメガエル卵を用いて調べた。ツメガエルの細胞で活性をもつCMVプロモーターの下流に蛍光タンパク質遺伝子をつなぎ、各トランスポゾン逆位反復配列間に挿入したプラスミドをレポーター遺伝子として使用した。これらの各レポーター遺伝子は、試験管内で合成した対応したトランスポゼースmRNAとともにツメガエル受精卵に共注入した。その後、受精卵をオタマジャクシまで発生させ、蛍光を発する割合を調べ、トランスポゾンの転移活性とした。なぜならば、オタマジャクシで蛍光を発するには導入されたレポーター遺伝子が染色体に組込まれる(転移する)ことが必要だからである。結果は、Minosを使用した場合、蛍光を発する胚がまったく生じなかったのに対し、Hermes,piggyBacを使用した場合数%の蛍光を発する胚が得られた。残念なことに、この蛍光を発する胚の得られる頻度が、共注入したトランスポゼースの量には依存していなかったことから、レポーター遺伝子の染色体への組込みが転移反応によるものとの確証はない。今後、染色体への組込み部位の同定、転移酵素活性の測定等を行う必要があろう。また、少なくともHermes,piggyBacのトランスポゾンを使うことでツメガエルへの遺伝子導入が可能なことが明らかになったことから、両トランスポゾンを使ってプラナリアへ遺伝子を導入すべくレポーター遺伝子を構築した。プラナリアで遺伝子を発現させるためにプラナリアactin、EFlalphaおよびEF2遺伝子の5'上流域を単離し、プロモーターとして使用した。
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